苯并α芘对栉孔扇贝分子毒理学机制的研究-study on molecular toxicology mechanism of benzo α pyrene to chlamys farreri.docx

11111111111111111111111111111111111111111111111111Y1830540谨以此论文献给找敬爱的导师滞鲁青教授，ChristopherMilesBarnhart教授和ChristopherGlennIngersoll博士商品晶苯并[α]昆对柿孔扇贝分子毒理学机制的研究学位论文完成日期:指导教师签字:答辩委员会成员签字:F/.0/宫M凡。可写了飞飞旋荔γ-Y在呐独创声明本人声明所里交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得(注:如没有其他需要特别声明的，本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:将品占，签字日期:)?/O年5月均日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门成机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。问时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书〉学位论文作者签名:t$1-e白导师签字语专签字日期:/o年5月均日苯并[a]昆对柿孔扇贝分子毒理学机制的研究摘要本文根据目前我国近海多环芳怪污染现状，选择近海养殖的经济贝类柿孔扇贝(Chlamysfarrerí)为研究对象，克降了柑孔扇贝的几种解毒代谢相关基因，包括芳:怪受体蛋白(AhR)、混合功能氧化酶巾的CYP4、谷脱甘肤硫转移酶中的GSTpi和外源物质抗性蛋白P即。研究了苯并[a]诧CBaP)作用下柿孔扇贝组织内BaP累积规律、解毒代谢酶的表达调控规律以及DNA损伤效应，并结合细胞毒性实验研究解毒代谢酶在DNA损伤形成中的作用，探讨BaP对柑孔扇贝的致毒的分子机制。本研究可为近梅多环芳腔生物标志物检测技术的建立提供理论依据，为解析多环芳烧对贝类的毒理学机制提供研究基础。柑孔扇贝劳烧受体蛋白Ch队hR的cDNA全长为2891bp，开放阅读框为2466坤，编码821个氨基酸残基，无信号肤，为胞内蛋白，含有三个核定位序列。BLAS丁分析表明Ch队hR与其它物种AhR基因具有较高的同源性，预测的蛋白结构与其它已知物种相似。Ch队hR含有螺旋幽环·螺旋结构(DNA结合区)和PAS结构域(配体结合区)，属于bHLH帽PAS转录因子家族。序列分析表明，Ch队hR的bHLH平S功能区与无脊椎动物相似性较岗，与脊椎动物相似性较低。半定最RT.PCR分析表明Ch队hR在消化盲囊中有较高的表达，其次在成熟♀性腺中，鲍、外套膜和闭壳肌中表达量较少。柑孔扇贝CYP450基因ChfCYP4的cDNA全长为1927bp，开放阅读框为1317坤，编码438个氨基酸残基，为胞内蛋白，含有内质网膜定位信号位点oBLASt分析表明ChfCYP4与其它物种ChfCYP4基因具有较高的同源性，预测的蛋白结构与其它已知物种相似。ChfCYP4推导的氨基酸序列中存在细胞色素P450家族半脱氨酸血红索铁签名序列(ISAGP阳叫CIG470)，签名序列中血红索铁结合位点Cys386高度保守。半定最RT-PCR分析表明ChfCY阳在成熟♀性腺和外套膜中有较高的表达，其次在销、消化盲囊和闭壳肌中也有一定的表达最。柑孔扇贝GSTpi基因ChfGSTpi的cDNA全长为692bp，开放阅读框为618bp，编码205个氨基西安残基，为胞内蛋白。BLAST分析表明ChfGSTpi与其它物种GSTpi基因具有较高的同源性，预测的蛋白结构与其它已知物种相似。ChfGSTpi氨基酸序列包括位于氮端的谷脱甘肤结合区(GSHbindingsite，G-site)和碳端的外源物质非特异性结合位点(H-site)，配体结合活性位点丁yr1高度保守。半定最RT-PCR分析表明ChfUSTpi;在外套膜中表达量最高，在其它组织中也有较高的表达。柑孔扇贝ChfPgp部分片段cDNA为1345bp，开放阅读框为630坤，编间210个氨基酸残基。BLAST分析表明ChfPgp与其它物种协基因的相应片段问源性较高，预测的蛋白结构与其它已知物种相似。ChfPgp氨基酸序列包括位于氮端的ATP结合区和ABC转运位点LI07SGGQKQRVAl16等保守区域。半定量RT-PCR分析表明ChfPgp在外套膜中表达量最低，在其它各组织中均有较高的表达。BaP(0.05、0.2、0.8μgIL)染毒IOd清除5d测得