不同浓度tnf-α对兔视网膜müller细胞glast的影响-effects of different concentrations of tnf - α on glast of rabbit retinal m ü ller cells.docx

目录中文摘要………………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………………3 前言……………………………………………………………………………………5 实验一 胰蛋白酶消化法体外培养兔视网膜Müller细胞…………………………..8 材料与方法…………………………………………………….…………….8结果…………………………………………………………………………12 讨论…………………………………………………………………………13 结论…………………………………………………………………………15实验二 不同浓度TNF-α对兔视网膜Müller细胞生长活性的影响……………..16 材料与方法…………………………………………………………………16 结果…………………………………………………………………………17 讨论…………………………………………………………………………18 结论…………………………………………………………………………20实验三 不同浓度TNF-α对兔视网膜Müller细胞GLAST表达量的影响……….21 材料与方法…………………………………………………………………21 结果…………………………………………………………………………22 讨论…………………………………………………………………………23 结论…………………………………………………………………………25全文小 结……………………………………………………………………………27 参 考 文 献 ……………………………………………………………………………28 致谢 …………………………………………………………………………………34 附图 …………………………………………………………………………………35 综 述…………………………………………………………………………………40- 2 -英文缩略词缩略词英文全称中文全称DRPDRdiabetic retinopathyproliferative diabetic retinopathy糖尿病性视网膜病变增殖性糖尿病性视网膜病变PVRproliferative vitreoretinopathy增殖性玻璃体视网膜病变FBSfetal bovine serum胎牛血清GFAPCRALBPglia fibrillary acidic proteincellular retinaldehyde- binding protein神经胶质纤维酸性蛋白胞内视黄醛结合蛋白TNF-αGStumor necrosis factor-alphaglutamine synthase肿瘤坏死因子-α 谷氨酰胺原合成酶PBSphosphate buffered saline磷酸盐缓冲液DMSOVEGFdimethylsulphoxidevascular endothelial growth factor二甲亚砜血管内皮生长因子GLASTROSglutamate/aspartate transporterreactive oxygen species谷氨酸/天冬氨酸转运蛋白 活性氧RGCretinal ganglion cell视网膜神经节细胞Gluglutamate谷氨酸- 3 -不同浓度 TNF-α对兔视网膜 Müller 细胞 GLAST 的影响中文摘要目的：利用含不同浓度的 TNF-α的条件培养液对兔视网膜 Müller 细胞进行 体外培养，观察兔视网膜 Müller 细胞的生长变化情况，利用激光共聚焦显微镜 结合荧光免疫细胞化学染色法，对在不同浓度 TNF-α的作用下兔视网膜 Müller 细胞的 GLAST 进行定位、半定量分析，观察 Müller 细胞 GLAST 的变化情况， 深入探讨发生在不同浓度 TNF-α时，Müller 细胞对调节视网膜谷氨酸浓度作用 的影响。方法：使用酶消化法培养兔视网膜 Müller 细胞；通过相差显微镜、HE 染色、 荧光免疫技术、电镜观察其形态特征及特殊的免疫标记物进行细胞身份鉴定和纯 度的评估。分别在培养液 TNF-α浓度为 0 pg/ml、20pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、 200pg/ml 培养条件下培养 48h 后，通过 MTT 法测定 Müller 细胞的生长活性的变 化；采用荧光免疫技术，对 Müller 细胞胞膜上的 GLAST 进行荧光标记，通过图 像分析软件测定平均光密度值观察 Müller 细胞的 GLAST 表达的变化。统计学分 析：采用 SPSS11.0 统计软件进行分析，所有数据以均数±标准差表示，采用单因 素方差分析，p0.05 有统计学意义。结果：（一）、通过使用酶消