02培养基的制备和细菌的接种及生化反应 - 新乡医学院.pptVIP

培养基的制备和细菌的接种 概念 培养基是人工配制的微生物生活环境，其主要用途是繁殖及分离接种微生物，传代或保存微生物，鉴别微生物的类属，研究微生物的生理及生化特性，制造菌苗、疫苗或其他微生物制剂等。其营养成分包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。 分类 分类 培养基的制备程序 调配 过滤 矫正pH（7.0-7.6） 分装过滤 灭菌（121.3℃，20-30分钟） 鉴定是否有菌 放入冰箱冷藏备用 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然后观察 肉汤培养基制作方法 1.将已去筋膜及脂肪并经绞碎的鲜牛肉50克，加蒸馏水100ml，放入冰箱中过夜。 2.加热煮沸半小时至一小时后，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100 ml。 3.于滤液中加入氯化钠0.5克，蛋白胨1克，磷酸氢二钾0.1克，加热使之完全溶化。 4.测定酸碱度并调至pH7.6，必要时用滤纸过滤。 5.按需要分装于试管或烧瓶内，加棉塞，置高压蒸汽灭菌器内，经121.3℃、20-30分钟灭菌。 6.灭菌后置37℃温箱孵育24小时，无杂菌生长，即可应用或放冰箱备用。 液体培养基加入1-2%的琼脂为固体培养基，加入0.5%琼脂为半固体培养基。固体培养基加入血液即为血平板（营养培养基）。 细菌的接种 普通琼脂培养基：分区划线接种 半固体培养基：穿刺接种 液体培养基接种 细菌的接种 分区划线 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后接种环应灭菌. 生长现象的观察 菌落：一个细菌不断分裂而成的细菌群体称之。在普通琼脂平板上观察菌落的形态、大小、表面、边缘、湿度、透明度；在血平板上还要观察溶血情况和色素等。 细菌在半固体培养基上生长主要看是否有鞭毛，即观察细菌的运动。 细菌在液体培养基上的生长现象：混浊生长（大多数细菌）；沉淀生长（链球菌）；膜样生长（专性需氧菌，如结核分枝杆菌、枯草杆菌）。 　细菌的生化反应 新乡医学院微生物学教研室 细菌的生化反应试验：检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以区别和鉴别细菌种类的生化试验，称为细菌的生化反应试验。 细菌的生化反应是鉴别细菌的重要依据。 一、糖发酵试验 [原理]细菌对糖类的分解能力各异。有的细菌能分解某些糖而产酸产气，有的 细菌只能产酸，有的不能分解。因此，可根据各种细菌对 糖类分解能力的不同来 鉴定细菌的种、属 。 [方法]在未接种细菌前，糖发酵管培养基应呈澄清紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24小时，观察结果。 〔结果〕观察结果时，先确定细菌是否生长，生长时培养基变浑浊。如细菌发酵糖类产酸，则培养基中指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。如发酵糖类产酸产气时，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“　　”表示。如 不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 二、靛基质试验(吲哚试验） [原理]某些细菌含色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基质。后者与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。 [方法]将大肠杆菌、产气杆菌分别接种在富含色氨酸的蛋白胨水培养基 中，37℃培养24－48小时取出，在上述细菌的培养液内各加入靛基质试剂数滴，略加振摇，静止半分钟后，在两液面接触处出现玫瑰红色环者，为靛基质试验阳性，以“+”表示；不出现红色环者为阴性，以“-”表示。 [结果]大肠杆菌为阳性；产气杆菌为阴性。 三、硫化氢产生试验 [原理]某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 [方法]分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37℃孵育24小时后观察，沿穿刺线部位呈黑褐色为阳性，表明有硫化氢产生，以“+”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。 [结果]大肠杆菌：-；变形杆菌：+ 四、甲基红试验 产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，经脱羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，不能生成乙酰甲基甲醇，培养液pH小于4.5，甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性。 五、V－P试验