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-、葡萄组织培养的意义 葡萄属葡萄科(Vitaceae) 葡萄属(Vitis) 落叶木质藤本浆果果树。葡萄科植物共有14 个属968种植物，葡萄属植物中具有经济价值的约20种。全世界葡萄栽培面积达1000万 Hm2，占世界水果产量的30%以上，仅次于柑橘。葡萄果实除鲜食外，主要用于酿酒，还可 制成葡萄汁、葡萄干和罐头等加工品。葡萄不仅味美可口，而且营养价值较高。成熟浆中 含有15%~25%的葡萄糖和果糖以及多种对人体有益的矿物质和维生素。 葡萄生长周期长，基因多呈杂合状态，限制了有性杂交育种的开展。葡萄长期营养繁殖育种导致病毒感染、果实品质下降和产量降低。植物组织培养技术和基因工程技术的发展为葡萄育种、苗木快繁、种质资源保存以及病毒脱除开辟了一条有效途径。 二、葡萄组织培养技术 ㈠外植体的选择与催芽处理 葡萄组织培养所用的外植体材料有茎尖、茎段、腋芽、叶片、叶柄、根尖、花粉、花 药、胚、胚珠、胚乳、子房等，可以是整个器官，也可以是部分组织;可以是单细胞，也可 以是原生质体。无论选择何种器官或组织做外植体，都必须使用无菌材料。以葡萄茎尖外植体时，应选取品种特性优良、生长健壮、无病虫害的休眠枝条，用0.01片的6-BA 溶液浸泡24h，打破休眠，然后扦插到盛有无菌基质的苗床上，置于洁净的室内或培养箱中促使其萌发，温度控制在25~28℃.。若生长季节于田间取材，则要在晴天、无露珠时进行，然后将材料插入培养液或自来水中，置于室内或培养箱中进行预培养。 (二) 芽的培养与诱导再生 1．取材与消毒 当催芽处理的材料长出新梢l0~l5cm时，取4~5cm的嫩梢，自来水冲洗15-30min，然后剪取1cm的茎尖，除去幼叶后置于无菌条件下消毒:先用2%次氯酸钠溶液申浸泡消毒3~5min，用无菌水冲洗3~5次，再用0.1%升汞溶液浸泡5~10min，用无菌水冲洗3 ~5次，无菌滤纸吸净材料上的水分，备用。 2．接种和培养 无菌条件下，将芽放在解剖镜下用锋利的解剖刀切取0.5~lcm的茎尖，接种于事先准备好的诱导培养基上进行培养。诱导培养基为l/2MS+6-BA0.01mg/L+IAA0.2mg/L＋KTl.0mg/L。培养温度为 (25士2) ℃。接种1~ 2 周暗培养，2 周后光照﹙12~16h／d,1000~3000lx)培养，15d后可见到不定芽长出。 3．影响葡萄外植体成活、分化的因素 ⑴ 影响葡萄外植体存活的因素 蒋迪军等 (1992)认为葡萄外植体的大小以0.5~lcm最适宜，取材以春季嫩梢成活率最高，消毒剂以升汞消毒效果最好，其浓度为0.1％，消毒时间为5min。 ⑵ 影响葡萄外植体诱导分化的因素 基因型是葡萄再生的制约因素，不同基因型﹙品种)的外植体再生能力差别较大。葡萄茎尖有较强的器官发生能力，茎尖部位的叶片不定芽再生能力高于茎段部位，基因型相同的条件下，叶片再生不定芽的能力与叶龄成反比。 -(三)壮苗、生根与移栽 1．壮苗与生根培养 当不定芽长至2~3cm以上时，为了获得大量健壮的试管苗，就要从生长缓慢的诱导分化培养基中，将不定芽转接到生长快的壮苗生根培养基中培养。方法是无菌条件下将试管苗剪成带叶单芽段接人壮苗生根培养基中培养。培养基为：1 /2MS+IBA0.1~1.0㎎/L。一般转接l0~15d开始生根，30~35d可长成具有5~6片叶的小苗。生根培养时，IBA的浓度不宜过高或过低。过高会诱导芽基部产生大量的愈伤组织，抑制不定根的生成；过低会造成不生根或生根数量较少。培养条件为温度 (23士2) ℃，光照l6h/d；光强2000~3000lx 2．炼苗与移栽 春夏季对试管苗进行强光照 (2500~3000lx)培养1周，打开瓶盖，自然光下炼苗3~7d，待叶片油亮、幼茎呈淡红色时，将生长势强、根系粗壮的试管苗从培养瓶中取出，用无菌水洗净其根系上的培养基，转入盛有适宜培养基质 (如无菌珍珠岩或腐殖土与河沙按3 :l的比例配制的混合土) 的营养钵中，用1/81MS+IBA0.0lmg/L 的营养液浇透基质，并将营养钵移人拱栅内进行炼苗。先遮荫培养l~3d，再逐渐增加光照10~14h／d,1000~3000lx)，最初3d，温度为 (25士2) ℃，空气相对湿度为80％~90%;后期温度为25~28C，相对湿度可降为70％~80％。移栽5d后开始通风，并逐步加大通风量和通风时间。3周后即可除去棚膜，将长出新叶和新根的幼苗移人大田。 一、草毒组织培养的意义 草莓 (Fragaria spp.) 属蔷薇科 (Rosaceae)草莓属 [Fr0garia)多生草本植物，园艺学上属浆果类果树。草