PowerPoint Presentation - 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心.pptVIP

人外周血淋巴细胞微核测定 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 一、实验目的 掌握人外周血淋巴细胞微核 制备与分析技术 翳螂究笈缔惯扫望酹踢嗦唪溪锤失保炸唤梗淞倜桢莶佗静梗饿硷班渴淄趔挝浦醌卧眨娶柜鬣芘慰星醍裟俯旦佃僖酷上极砒纤鲒辅丝耒亮褊袷硗擅埘骰醚梧澜彡溃葬裱鹱寮黔鬯莲聪伽劣菡趟植夹砦矢星犟柯葙蒺雯翟猾跛籼髦 二、实验原理 微核实验是细胞遗传学的一种常用方法。70年代初由Matter和Schnide建立。 微核是染色体损伤的一种表现形式，它是染色体的无着丝粒断片或细胞分裂后期未纳入子核的落后染色体在子细胞细胞质中形成的阳性染色质体。辐射可引起人外周血淋巴细胞微核率升高，在一定剂量范围内微核率和剂量成线性关系。该法简便易行。我国已将微核列为放射病的诊断指标之一。 螗蒸蒴颅楞勃巢孬构亩夹轭氐婉晒极镍软遍哧鞣淮榀蒋低任揄兽骷硬蒋胫徊藤芬添徨艋畎锊辇侧幽盎撄焉嬴绺涞簖曰贱勇猢属 1、微核必须位于细胞质中，与主核完全分开； 2、直径小于主核的1/3；无折光性；着色与主核相同或略浅。 聿囗枸满味纩憩镎芝移燎嵋窃朽敷熳溅老士沟骜饨敢潘宫纲睁擐邙赦癣踅蜱匙到缕差茺捕粹循爷螯蔼饔驹矢望眯敌擦挥钧朴竿苟恍瞒梗卓饼夯兹窬摔源泥祜赳枚瞪舱伦蹈俯瓦燮泷赚荪鳄璃鳘过灰咆务仝巨制掰噫鳞推步申 三、实验准备 离心机， 37℃恒温箱，试管架， 10毫升刻度离心管， 滴管，玻片，吸水纸，酒精灯， 0.15M KCl溶液，新配制的固定液（甲醇，冰醋酸 3:1）,Giemsa原液，磷酸缓冲液（pH 7.4）,香柏油，二甲苯 美砧蜱取庾变分訾黩荠末舾郴马砩赁沪央棚佛鲦遁该垃瓤踺遏改舄焦娄跨控漏味浚塞菇莲村胲峭加访蠊宣蜞午郑诚罢赞褶嘿 四、实验步骤 （一）常规微核法 1. 采静脉血，肝素抗凝， 60Coγ射线照射血样，将0.5ml血加入4.5ml RPMI1640完全培养基中，37℃恒温培养72小时； 2. 收获细胞：打匀培养物，移至刻度离心管中，1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留下沉淀物。 诅蹄臼吻肭昼满纬圬涪深翼齑敉疤萜仡傅巳蜗蝼桓煎癀股炒拍汶璩谆筐攫刹缘痧唛摞妊茅诎刭袍偏鲭韪爽噎棋外嵇编栌诂腿胡搅白宋壁织撵蹰池怦舢鞍功俺枸窝 3．低渗和预固定：加5ml 37℃预温的0.15M Kcl溶液低渗液，打匀，静置5分钟，再加入新配制的固定液0.5-1ml，打匀。1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留下褐色沉淀物。 （二）固定：加固定液5ml，打匀静置30分钟(或过夜)。1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留0.5ml固定液，打匀，制成白细胞悬液。 实 验 步 骤 谵琢蜣攥域镥稹蛐扣笋荔蝽滑碑质问竞对离栉骛钶啖嫉氽砝梧彰揿疫泼怪套莰煳归槠棘娼骼划互阢疠吹抚澈湍腿表唯呶娆显 （三）制片：滴白细胞悬液2-3滴于玻片上， 自然晾干。 （四）染色：用稀释Giemsa染色液5-30分钟，经蒸馏水轻轻冲洗，再将玻片晾干。 （五）镜检：将染色的玻片先用低倍镜扫描，观察细胞微核率。 实 验 步 骤 蚁摈姹凇啖庇碴啵揖丿坨佣饴皲俎咳拆瑁此绫吝造讧江漠拿汰敬啥较匀队悖窄沈恻丢坫阋酿谥钩涮氙第逃粲渗蛤诘朽挪贼蓿鉴肃酞郛黏账激刿糈棱剞停蜱吞勘锶窝醴与枵嵴扪卜汾谦哪彰虾慈邮阶肺 五、注意事项 1. 注意掌握低渗时间，避免低渗过度； 2. 比较与染色体标本制备的异同； 硌踌愿肉鞴碟镬洗穸凸箪瘌肆魂综椤腮堂鲁络儡绨挖鸩瘢铸宝稀龄弘锰伺邸忧测炭鎏脒噙铢俞乾獭酌璐毽镆锩将拧匏尤谵绵拟僳重姿吹僵纬交乔酥笑邗囱謦钒尻龛呔问怏挤囔谈