大肠杆菌感受态细胞的置备与质粒转化ppt课件.pptVIP

大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 ;一. 实验目的 通过本实验，学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。 ;二. 实验原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 ;转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入受体细胞，使其获得新的遗传性状的一种技术方法。 进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。;大肠杆菌转化的方法： 化学法：使用化学试剂（如CaCl2）制备的感受态细胞，通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞； 电转化法：通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。;转化子的筛选： 利用导入的DNA上的选择性标记，区分转化子与非转化子。 选择性标记主要有两类： 营养筛选标记 抗性筛选标记 ;三．实验方法 ;;;;;;;;;3．将培养液4ml转移到5ml离心管中，4℃，2000g离心3min 4．弃上清，加0.5mL用冰预冷的0.1 M CaCl2溶液，轻轻吹打或摇动混匀细胞 注意：加入CaCl2动作需轻柔，勿剧烈震荡，并且尽量使细胞处于低温中 ;;;;;;;5．冰上放置20min，200