[工学]第七章 原核生物基因表达的调控.ppt

大肠杆菌CsrAB调节系统 在CsrAB系统中，CsrA是一个RNA结合蛋白，CsrB是非编码的RNA分子，CsrB有一个家族。CsrA可以结合到受其调控的mRNA上，促进该mRNA的降解，也可以结合到CsrB上。CsrB过多会抑制CsrA的作用。 在糖原合成途径中，如果CsrA结合到glg基因（编码UDPG焦磷酸化酶）的mRNA分子上，该mRNA分子就易于受核酸酶攻击，其降解过程很快。 CsrAB调节系统对glg基因mRNA的调节 三、调节蛋白的调控作用 细菌中有些mRNA结合蛋白可以激活翻译，也有些可以抑制翻译。大肠杆菌BipA蛋白能激活转录调控蛋白fis mRNA的翻译，是fis蛋白合成所必需的。相反，当核糖体蛋白表达量过多时，能结合到自身mRNA的核糖体结合位点（RBS），抑制翻译。 四、反义RNA的调节作用 反义RNA是与mRNA中某一段序列互补的小分子RNA，反义RNA与mRNA的前体互补可阻碍剪接，与成熟mRNA的翻译起始区互补可抑制翻译。但有些反义RNA也能促进翻译。 细菌铁蛋白用来贮存细胞中过剩的铁离子，铁蛋白基因是bfr。无论铁离子浓度高低，bfr基因都正常转录出mRNA，而编码其反义RNA的基因anti-bfr的转录却受能够感应到铁离子浓度变化的Fur蛋白的调控。细胞中铁离子浓度高时，Fur蛋白关闭anti-bfr基因的转录，使得bfr的mRNA能够翻译出铁蛋白。 Anti-bfr基因转录产生的反义RNA对bfr基因mRNA翻译的的调节作用 五、翻译的阻遏 噬菌体Qβ的单链RNA基因组是正链RNA，包括三个基因：成熟蛋白基因A，外壳蛋白及RNA复制酶。 当噬菌体Qβ的RNA进入细胞后，立即作为模板翻译出这三种蛋白质。正在翻译的核糖体影响了复制酶对此RNA的复制，但复制酶可以结合到外壳蛋白的翻译起始区，阻止核糖体的结合。当已经结合的核糖体完成翻译脱落后，复制酶就可以从RNA的3’端开始复制。在外壳蛋白的翻译起始区和RNA的3’端都有CUUUUAAA序列，能形成茎环结构，具备翻译阻遏特征。 六、稀有密码子对翻译的影响 dnaG(引物酶) RNA引物 dnaG、rpoD和rpsU属于大肠杆菌基因组上的同一个操纵子 50个拷贝的dnaG蛋白、2800个拷贝的rpoD和40000个拷贝的rpsU 几种蛋白质中异亮氨酸密码子使用频率比较 蛋白质 AUU/% AUC% AUA% 结构蛋白 37 62 1 σ亚基 26 74 0 DnaG蛋白 36 32 32 细胞内对应于稀有密码子的tRNA较少，高频率使用这些密码子的基因翻译过程容易受阻，影响了蛋白质合成的总量。 七、重叠基因对翻译的影响 TrpB –谷氨酸- 异亮氨酸-终止 GAA -- AUC -- UGA -- UGG -- AA AUG -- GAA 甲硫氨酸 – 谷氨酸–trpA trpE—苏氨酸—苯丙氨酸—终止 ACU -- UUC -- UGA -- UGG -- CU AUG AUG – GCU 甲硫氨酸 -- 丙氨酸-- trpD 翻译终止时核糖体立即处在起始环境中，这种重叠的密码子保证了同一核糖体对两个连续基因进行翻译的机制。 八、RNA高级结构对翻译的影响 以RNA噬菌体f2的RNA作为模板，在大肠杆菌无细胞系统中进行蛋白质合成时，大部分合成外壳蛋白，RNA聚合酶只占外壳蛋白的1/3。用同位素标记分析RNA噬菌体几种蛋白质的起译过程，发现外壳蛋白起译频率比合成酶至少要高3倍。 研究发现f2外壳蛋白基因的琥珀突变也影响了RNA聚合酶合成的起始。但若该突变不是发生在外壳蛋白接近翻译起始区，而是较靠后的位点，对RNA聚合酶的起译就没有影响。现在一般认为，聚合酶的翻译起始区被RNA的高级结构所掩盖，外壳蛋白的起始翻译破坏了RNA的立体构象，使核糖体有可能与翻译起始区结合，导致聚合酶的起译。用甲醛处理RNA可以增加聚合酶的产量，这说明RNA的高级结构对基因表达调控的可能性。 九、魔斑核苷酸水平对翻译的影响 ? GTP+ATP→pppGpp+AMP→ppGpp? 　ppGpp的主要作用可能是影响RNA聚合酶与启动子结合的专一性，从而成为细胞内严紧控制的关键。当细胞缺乏氨基酸时产生ppGpp，可在很大范围内做出应急反