海洋天然产物的电喷雾电离质谱(esi-ms)及其乙酰胆碱酯酶抑制活性构效关系分析-electrospray ionization mass spectrometry ( esi - ms ) of marine natural products and its structure-activity relationship analysis of acetylcholinesterase inhibitory activity.docxVIP

海洋海洋天然产物的电喷雾电离质谱（ESI-MS）及其乙酰胆碱酯酶抑制活性构效关系分析II海洋天然产物的电喷雾电离质谱（ESI-MS）及其乙酰胆碱酯酶抑制活性构效关系分析 摘要海洋环境的特殊性（高盐、高压、低温和寡营养等）造就了海洋生物独特的 生活环境，因而其代谢途径特殊、复杂，产生的次级代谢产物往往都具有化学结 构新颖性和生物活性多样性的特点。每年都有近 1000 个新的海洋天然产物的报 道，其中来源于海绵、珊瑚及其共附生微生物的就占据差不多二分之一的份额。在海洋天然产物在结构确定过程中，质谱分析方法起到了至关重要的作用， 目前常见的质谱分析方法包括，电子轰击电离质谱（EI-MS）、快点子轰击电离 质谱（FAB-MS）、基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）以及电喷雾电离 质谱（ESI-MS）。其中 ESI-MS 具有快速、高效、灵敏度高等优点，被广泛应用 于天然产物领域。本研究通过对 101 个本课题组提供的来源于海绵、珊瑚及其共附生微生物 的天然产物进行电喷雾电离质谱（ESI-MS） 分析，旨在找出常见的海洋天然产 物结构类型在进行 ESI-MS 分析时的出峰规律，为今后对常见的海洋天然产物结 构类型适宜于哪种电喷雾电离质谱分析模式，以及如何利用电喷雾电离质谱筛选 化合物结构类型提供借鉴。总结发现一般含有碱性基团的化合物适合正离子分析模式，如甾体、甾体皂 苷、倍半萜、二萜、二倍半萜等结构类型的化合物适合 ESI (+) 模式分析，常见 [M+H]+、[M-H2O+H]+、[M+Na]+、[M+K]+、[2M+H]+、[2M+Na]+、[2M+K]+ 等离子峰；含有酸性基团的化合物适合负离子分析模式，如聚酮、色原酮、口山酮、 环肽、醌类、内酯、甘油醚等结构类型的化合物适合 ESI (–) 模式分析，常见 [M-H]–、[2M-H]– 等离子峰。含有两性基团的化合物理论上在这两种分析模式下 都可以被电离，例如含有多个羰基和羟基的色元酮类化合物，在两种分析模式下 都可以被电离。不含有极性基团的化合物不能被电离，而有部分化合物虽然含有 极性基团，但同样也可能不会被电离，例如不含羰基的多羟基甾体类化合物。同时对同位素峰、高分辨质谱、多级质谱以及质谱分析方中的注意事项进行 了探究和讨论。例如，当化合物分子中含有氯原子，那么在质谱分析图中会出现IIII丰度比 3：1 且质核比相差 2 的同位素离子峰，而含有溴原子的化合物则会出现丰度比 1：1 且质核比相差 2 的同位素离子峰。高分辨质谱可以帮助我们更好的 确认待测化合物的分子式，同时高分辨质谱图中会给出分析过程中某一时刻样品 的浓度以及离子峰的丰度等信息。多级质谱则会更加明确的佐证待测化合物中含 有的结构片段，从而保证解析出来的化合物的结构的正确性。而质谱分析结果会 受到化合物的溶解度、进样量等因素的影响。本研究的另外一项工作是，对本课题组来源的 136 个天然产物以及部分经过 结构修饰的天然产物，进行乙酰胆碱酶活性抑制实验，目的在于筛选活性化合物， 以及通过构效关系分析总结活性化合物的结构类型及其结构特点，以期为从海洋 天然产物中筛选乙酰胆碱酯酶活性抑制剂提供参考意见。经过活性测试，发现有 57 个化合物显示具有活性，结构类型包括橘霉素、 甾体、倍半萜、生物碱、内酯、异香豆素、肽类、蒽醌、苯甲醛衍生物等，并且 筛选出 4 个具有中等以及微弱活性的化合物，其 IC50 值分别为 78、42、23 和 166μM，其中包括 2 个橘霉素和 2 个甾体，而关于橘霉素具有乙酰胆碱酯酶抑制活 性的报道目前还没有。对这些化合物及其实验数据进行构效关系分析，发现氢化蒽醌活性低于芳香 化蒽醌，C-4 位的-OH 会大大降低活性，而 C-3 位的侧链变长有利于增强活性。 二聚体的橘霉素活性强于单体化合物，分子中 C-2’ 位甲酸酯基会大大降低活性。 对于异香豆素来说分子中含有长侧链时会增强化合物的活性， C-3、C-4 位芳香 化会大大降低化合物的活性。结合文献调研，发现具有活性的化合物其结构往往含有氮原子，具有疏水侧 链，以及分子相对小等特点。并且影响活性强弱的因素有很多，如侧链的长短和 空间构型、关键取代基的位置、双键的位置等。关键词：海洋天然产物，电喷雾电离质谱，乙酰胆碱酯酶抑制活性，构效关系IIIIIIAnalysis of ESI-MS and structure-activity relationships of inhibitory activity on acetylcholinesterase of marine natural productsAbstractThe particularity of the ocean environment (high salt, hig