高脂饮食对小鼠pgc-1α基因表达的影响及转录调控机制的研究-effects of high fat diet on pgc - 1α gene expression in mice and study on transcriptional regulation mechanism.docx

万方数据万方数据2.3 油酸对小鼠肝细胞和肌肉细胞 PGC-1α 基因转录的调控机制533. 讨论624. 小结64第三部分、Akt/FoxO1 与 p38/MAPK 对小鼠肌肉细胞 PGC-1α 表达的转录 调控机制 651. 材料和方法 672. 实验结果74 HYPERLINK \l _TOC_250000 2.1 高脂饮食喂养的小鼠的肌肉细胞 PGC-1α 的表达以及 Akt、p38 MAPK 的活化 742.2 p38 MAPK 的活化能刺激 c2c12 细胞 PGC-1α 基因的转录762.3 p38 MAPK 主要通过 CREBP/CRE 通路调节 c2c12 细胞 PGC-1α基 因 的 转 录 7 72.4 PGC-1α 启动子转录活性的活化依赖于 CRE 与 IRE 的协调782.5 Insulin 抑制 PGC-1α 启动子的转录活性和 PGC-1α 的表达 802.6 Insulin 抑制 PGC-1α 启动子的转录活性和表达的信号通路823. 讨论844. 小结86结论875参考文献 88主要缩略语及英文索引 92综述94综述参考文献103攻读学位期间的主要科研成果112致谢1146高脂饮食对小鼠 PGC-1α基因表达的影响及转录调控机制的研究 研究生 洪 涛 指导教师 文格波教授中文摘要过氧化物酶体增生物激活受体-γ 辅激活子-1α （PGC-1α） 是线粒体相关基因的 转录辅激活因子，最早作为调控脂肪细胞分化的核受体PPARγ的辅激活因子被发现， 它参与能量代谢调节的诸多方面，并与哺乳动物的心脏发育、骨骼肌纤维类型转换及 机体禁食后的肝糖异生调节等过程有关。PGC-1α以特殊的组织模式表达，在棕色脂 肪组织、心、肾、骨骼肌中相对含量较高。在这些组织中，PGC-1α的转录表达受寒 冷、饥饿、耐力运动、感染等刺激调控，以调节线粒体能量代谢、肝糖异生等代谢稳 态，适应机体需要。PGC-1α的表达异常或活性缺陷与代谢综合征、2型糖尿病等代谢 性疾病密切相关。为探讨高脂饮食对 PGC-1α 表达的影响及转录调控机制，以及 PGC-1α 在肥胖诱 导的胰岛素抵抗发生过程中的作用，本研究通过高脂饮食喂养 C57BL/6 小鼠，诱导高 胰岛素血症和胰岛素抵抗的发生，再通过特异性的 PI3K 抑制剂 LY294002 来阻断胰 岛素信号通路，检测 PGC-1α 基因以及与线粒体合成与功能相关的基因的转录与表达 水平的变化。结果表明，高脂饮食喂养的 C57BL/6 小鼠肝脏和腓肠肌内 PGC-1α 表达 下调；高脂饮食诱导的高胰岛素血症是 PGC-1α 及线粒体相关基因的转录与表达下降 和线粒体功能异常的主要原因之一。然后，通过构建含有 PGC-1α 启动子序列的荧光 素酶融合表达载体，并在其基础上构建失活各个转录因子反应位点的突变型载体，将 这些载体转染到小鼠肝细胞和骨骼肌细胞，予以游离脂肪酸、胰岛素等环境因素处理 后，检测 PGC-1α 启动子转录活性的变化，并进一步研究传递这些环境变量的信号通 路，以及这些信号通路之间的相互作用对 PGC-1α 启动子转录活性影响。结果显示， PGC-1α 基因启动子的基础转录活性主要依赖于启动子区内 CRE 及 IRE 反应元件，其 转录活性受到胰岛素和 p38 MAPK 的共同调节；油酸能够通过 p38/CREBP/CRE 和 p38/MEF2/MEFRE 信号通路刺激 PGC-1α 的基因转录；而胰岛素通过 Akt/FoxO1/IRE7信号通路抑制 PGC-1α 基因的转录，且胰岛素可能是起主导作用的 PGC-1α 转录负向调控因子。以上实验结果表明，能量摄入过多导致高胰岛素血症，体内持续激活的 Akt 信号可能是 PGC-1α 转录水平低下、线粒体相关基因表达下降和功能异常的主要 原因之一。由于线粒体的数量下降和功能障碍与胰岛素抵抗的发生密切相关，我们的 结果可能为理解胰岛素抵抗的发生机制提供了新的思路，也为临床上预防和治疗以胰 岛素抵抗为核心的代谢性疾病提供了新的理论依据。第一部分 高脂饮食诱导的高胰岛素血症导致线粒体功能障碍 及胰岛素抵抗目的：探讨高脂饮食对小鼠 PGC-1α 表达的影响以及高脂饮食诱导的高胰岛素血 症与小鼠 肝脏和肌 肉 线粒体功 能障碍以 及 胰岛素抵 抗发生的 关 系。 方法： 给予 C57BL/6 小鼠高脂饮食，通过建立稳态模型法检测胰岛素抵抗水平；通过 western blot 检测 Akt 信号通路的活化；通过 western blot 检测 Tfam、NRF1 等线粒体相关基因的 蛋白表达变化；通过 Real-time PCR 检测 PGC-1α 等线粒体相关基因的转录变化；通 过检测