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生物修复： 通过途径工程净化环境 作者：花朵  结论 利用途径工程提高生物修复能力的必要性 利用途径工程处理污染物的研究进展 主要内容 利用途径工程提高生物修复能力的必要性 途径工程（Pathway Engineering），被称为第三代基因工程，是一门利用分子生物学原理系统分析细胞代谢网络、并通过DNA重组技术合理设计细胞代谢途径及遗传修饰、进而完成细胞特性改造的应用性学科。 利用途径工程提高生物修复能力的必要性 许多微生物天生具有降解、转化或螯合各种毒性化合物 的能力，但效率都比较低。 因此，有必要通过途径工程对微生物进行操作或改造， 提高其去污的能力。 利用途径工程处理污染物的研究进展 利用途径工程 处理无机污染物 重金属 放射性核素的高 容量生物修复 研究进展 利用途径工程 处理有机污染物 高效处理OPs 生物去硫 降解硝基芳香族化合物 提高菌体对特定 重金属的选择性 提高重金属富集量 利用途径工程处理污染物的研究进展 对重金属的高容量生物修复 微生物遇到重金属时易产生金属结合肽，络 合重金属减少其毒性。如：PCs、MTs PCs的化学结构图 Vacuole PCs的合成过程 → 大肠杆菌中AtPCS的过表达 金属累积量增加20倍 共表达负责GSH 生产的酶 解决 方法 → 通过在能够提供足够GSH 的S. cerevisiae中表达PCS PC产量 增加10倍 PCs： PC的前体物质GSH的限制是重金属累积的瓶颈。 MTs和PCs结合重金属的一个特点是非选择性 解决方法： 1）改造特定重金属的转运体 2) 利用在特定的金属污染场所自然突变的MTs 对放射性核素的高容量生物修复 利用基因工程技术定向改变微生物的基因结构可 以解除该微生物固有的一些物理、化学和生理方 面的限制，提高微生物对放射性核素的选择性、 亲和力及吸收能力。  利用途径工程处理有机污染物 有机磷酸酯类(OPs） 被用作杀虫剂，包括对氧磷、对硫磷或甲基对硫磷。 利用途径工程处理污染物的研究进展 利用途径工程处理污染物的研究进展 对氧磷、对硫磷、甲基对硫磷 表3 微生物降解有机磷农药的重要作用位点和酶的种类 作用位点 P-0-烷基 P-O-芳基 O = P-NH -烷基 -NO2 C- P 苯环 酶的种类 水解酶 水解酶 水解酶 氧化酶 还原酶 裂解酶 氧化酶 酶催化作用 亲核进攻脱烷 氧基、对硫磷、甲胺磷等有机磷农药降解途径 对硫磷 降解的 途径 甲胺磷 水解的 主要途 径 包括甲氧 基乙氧基 等，有机 磷农药降 解去毒重 要途径 将硝 基还 原成 氨基 碳-磷键断 裂，有机磷矿化的必经途径 羟基 化、苯环 开环 改善OPH的催 化活性的方法 改善OPH催化活 性的途径工程方法 体外同源重组技术 定向诱变 易错聚合酶链反应 OPs 亚磷酸二烷基酯 初期水解作用 PNP + 共同培养能水解对硫磷和二乙基硫羟磷酸铵的大肠杆菌和对硝基 苯酚的天然降解者（恶臭假单胞菌），可成功分解对硫磷。 开发降解途径需要的微生物菌群 利用设计的莫拉氏菌属或恶臭假单胞菌能自然降解对硝基苯酚 二、基于工程途径提高生物修复能力的研究进展 有机硫化合物的生物去除 有机硫化合物中，硫芴(DBT)是一种常见的模型分子，加 氢脱硫工艺不能消除化石燃料中的硫芴。硫芴的脱硫作用 需要一系列的酶。 （DBT）的脱硫过程 二、基于工程途径提高生物修复能力的研究进展 限速步骤 改造DszB的方法 插入含有可能的核糖体结合 位点的序列对DszB进行设计 → 改造DszB的5’非编码区 脱硫作用提高9倍 改造操纵子的细胞表达 提高了5倍 整个脱硫活性提高12倍 → ↓ 结论 各种工程方法的研究，生物降解知识库的扩展， 进一步促进设计新的生物去污方法。 * 生物修复主要是通过细胞积累或酶的转化对有毒污染物进行去毒或降解，使污染物浓度降低或转化为无毒产物。（Brar SK等，2006） * AtPCS拟南芥植物螯合肽合成酶 硫化物和植物螯合肽—金属的合成物对酵母具有一定的去毒作用， 这可能通过硫化氢的需氧生产进一步提高全部重金属的堆积作用。 * 生物修复主要是通过细胞积累或酶的转化对有毒污染物进行去毒或降解，使污染物浓度降低或转化为无毒产物。（Brar SK等，2006） * AtPCS拟南芥植物螯合肽合成酶 硫化物和植物螯合肽—金属的合成物对酵母具有一定的去毒作用， 这可能通过硫化氢的需氧生产进一步提高全部重金属的堆积作用。