高盐诱导虾夷扇贝patinopecten yessoensis三倍体的研究-study on triploid of patinopecten yessoensis induced by high salt.docxVIP

高盐诱导虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis）三倍体的 研究摘要本研究对虾夷扇贝的受精发育及一种新的三倍体诱导方法——高盐诱导，进 行了相关探讨分析。研究使用高盐处理的方法以抑制虾夷扇贝受精卵极体的释 放，成功获得三倍体虾夷扇贝。同时，研究对以高盐方法诱导虾夷扇贝三倍体的 诱导参数和虾夷扇贝受精发育过程、三倍体幼虫生长发育和存活等情况进行了分 析，为虾夷扇贝三倍体育种工作提供了理论和实践依据，也为贝类多倍体育种研 究提出了新的研究方向和思路。研究主要分为以下三个部分：1、虾夷扇贝的受精细胞学观察 研究采用二氨基苯基吲哚（DAPI）染色法，对虾夷扇贝的受精细胞学过程进行了荧光显微观察。观察结果显示：未受精的成熟卵子外形上近圆球形，核相 大多位于第一次减数分裂中期；精子呈圆形亮点状，随机入卵。精子入卵后体积 膨大成球形，刺激启动成熟卵母细胞的减数分裂，释放出极体。卵母细胞的第二 次减数分裂完成后，精核解凝、泡状化，体积膨胀，形成雄原核；卵子染色质去 浓缩，扩散膨大，形成雌原核。成熟的雌雄原核完成融合过程，最终形成二倍体 的合子。虾夷扇贝受精卵发育过程具明显的不同步现象。 2、高盐诱导虾夷扇贝三倍体最佳诱导参数的探讨采用高盐方法，在不同的处理持续时间（15min，20min，25min、30min、 35min）、不同处理时机（出现第一个第一极体、第一极体出现比例达 30%、第 一极体出现比例达 50%、出现第一个第二极体和第二极体出现比例达 20%时） 和不同高盐诱导盐度（S=35、40、45、50、55、60、65、70）下，分别抑制虾 夷扇贝受精卵极体的释放以获得虾夷扇贝三倍体，并综合结果，指出最佳的诱导 参数。结果显示：高盐处理液盐度达 S=60，且在第一个第二极体出现时开始处 理，持续处理 20min，得到的诱导结果最佳，诱导率最高可达 72.12%。 3、虾夷扇贝三倍体幼虫培养采用高盐诱导的方法，采用最佳诱导参数进行虾夷扇贝三倍体诱导工作，对 获得的扇贝幼虫进行培育，并分析其生长、存活情况。结果显示：以高盐盐度S=60，在第一个第二极体出现时开始处理受精卵，持续处理 20min，可获得虾夷扇贝三倍体幼虫，卵裂率为 31.09%，孵化率为 39.74%。平均诱导率为 71.70%。关键词：虾夷扇贝；高盐诱导；三倍体；荧光显微观察；幼虫Study of triploid induction in scallop Patinopectenyessoensis by hyperosmotic treatment AbstractTriploid breeding of shellfish is increasingly important and as a vital economic species in China, Patinopecten yessoensis was studied on fertilization with fluorescent microscope.A new method ,hyperosmotic treatment,was used inP.yessoensis triploid induction by blocking polar body I（IPB2）.This paper focused onthe suitable induction parameters,fertilization development process,genetic analysis,ploidy investigation,growth and survival during the stage of larval development.All information should be taken into consideration in breeding of scallop.The main contents consist of the following three parts.Cytological observation on Patinopecten yessoensis with fluorescence microscope.With the help of a fluorescence microscope,the fertilization of Patinopecten yessoensis stained with DAPI was observed.Unfertilized mature eggs show spherical shape,and nuclear phase was mostly at metaphase of mei