第三章 酶3.pptVIP

(1)竞争性抑制作用 A.概念：抑制剂与底物共同竞争与酶的结合，当I与E结合后就妨碍了S与E的结合，减少了酶与底物的作用机会，因而降低了酶的活力，这种作用称为竞争性抑制作用。 B.动力学特征 E+S ES→E+P E+I EI （1）竞争性抑制作用 C.竞争性抑制特点： I存在时改变Km而不改变Vmax的作用，当[S]很高时，抑制作用被解除。 反应在Lineweaver-Burk图上的特点是：有I存在时所得直线与无I时的直线在纵轴上交于一点，即纵轴截距相等都是1/Vmax，横轴截距负值减小，斜率增大。这个特点常用来判断 是否为竞争性抑制。 D.作用机制 抑制剂作用于酶的活性中心。 （2）非竞争性抑制 A.概念： I和底物一同与酶结合，但I与E的调控部位结合后，引起酶分子构象发生变化，从而导致酶活性下降，这种抑制作用叫非竞争性抑制。 B.动力学特征： （2）非竞争性抑制 C.特点： I存在时影响Vmax而不改变Km，不能用增大[S]的办法克服。 反应在Lineweaver-Burk图上的特点是：有I存在时得到的直线2和无I存在时得到的直线1在横轴上交于一点，即横轴截距相等都是-1/Km，但纵轴截距和斜率都增大，并随[I]增大而增大。这个特点常用来做为判断非竞争性抑制作用的根据。 D.作用机制：抑制剂作用于于酶的调控部位。 （3）反竞争性抑制 酶只有与底物结合后，才能与I结合生成三元复合物，但三元复合物不能分解为产物。 此作用多见于多底物反应中，在单底物反应中比较少见。 3. 抑制作用的应用 （1）在医药上用于治病 （2）在农业上用于设计新农药 （八）酶的别构效应 1.别构酶的特点： (1)是寡聚酶 (2)有四级结构 (3)有活性中心和调节中心(别构中心) (4)具有别构效应 别构效应:调节物与酶分子中的别构中心结合后,诱导出或稳定住酶分子的某种构象,使酶活性中心对底物的结合与催化作用受到影响,从而调节酶的反应速度及代谢过程,此效应称为酶的别构效应. (5)别构酶的初速度—底物浓度的关系不符合典型的米氏方程 2.别构效应的实例 以天冬氨酸转甲酰酶为例(ATCase) 经研究发现底物．CTP.ATP都可以使ATCase产生别构效应． (1)反应刚开始，反应体系中只有Asp．氨甲酰磷酸．ATCase酶． (2)反应一开始,向反应体系中加入CTP,其它条件同前. (3)反应一开始,向反应体系中加入ATP,其它条件同(1). 八.酶活力的测定 1.概念 酶活力就是酶加速其催化的化学反应速度的能力。 2.酶活力的表示方法 酶单位：一定条件下，1分钟内能转化1umol底物的酶量为一个酶单位。 katal(kat)：一定条件下，1秒钟内转化1mol底物所需要的酶量。 3.比活：每mg酶制品所含的酶单位数 九.酶的制备 用微生物发酵法来获得大量的酶制剂 酶的分离纯化与P的分离纯化方法相同 生物体内的酶有胞内酶与胞外酶两种 胞内酶:先将细胞破坏,再提取酶. 胞外酶:直接进行分离纯化 常用分离纯化酶的方法: 盐析法 有机溶剂沉淀法 吸附法 十.酶的应用 1.含酚废水的处理 原理:含酚废水在过氧化物酶的作用下,以过氧化氢为氧化剂,催化氧化各种酚类和芳香胺化合物,形成的氧化产物可以进一步聚合成为不溶性沉淀而被除去. 应用多酚氧化酶,以氧作为氧化剂,将酚废水中的酚氧化成邻苯醌化合物,它在水相中发生聚合反应沉淀或与其它芳香胺作用形成聚合物沉淀而除去. 2.含有残留有机氯农药土壤的处理 甲烷单加氧酶(MMO) 有机氯农药属于氯代烃类化合物. 氯代烃类化合物在甲烷单加氧酶(MMO)的作用下先转化成相应的醇,再在其它酶的作用下分解成无害物质. RCH2Cl →RCH2OH →RCCOOH * （1）竞争性抑制作用 特点：1）抑制剂和底物竞争酶的结合部位 S + E ES E + P + I ↑↓ EI v = ——————— V[S] km(1+[I ]/ki)+[S] ki = [E][I]/[EI] [S] v V/2 km 2）抑制程度取决于I和S的浓度以及与酶结合的亲和力大小。 km ′ 无 I 有 I 3）竞争性抑制剂的结构与底物结构十分相似。 B.动力学特征： S + E ES E + P + I ↑↓ EI + I ↑ EIS +[S] E+P v = ——————— ———— V 1+[I]/ki · [S] km + [S] [S] v 无 I V/2 km 有 I (′) [S] v —— [S]90%V [S]10%V = 81 —— [S]90%V [S]10%V ＜ 81 —— [S]90%V [S]10%V ＞ 81 ATCase（天冬氨酸转氨甲酰酶