38.临床标本的微生物检验（二）.ppt

临床标本的微生物检验（二） 程曦 检验医学院 复习提问 1. 试述血液标本的细菌学检验 2. 脑脊液的检验包括哪些方面 主要内容 1.呼吸系统感染的微生物学检验 2.消化系统感染的微生物学检验 3.泌尿系统感染的微生物学检验 要求 1.痰液标本采集和验收、检验程序、检验方法（标本的直接涂片检查、分离培养与鉴定）。 2.粪便标本的检验程序、检验方法（标本的分离培养与鉴定）。 3.尿液标本的检验程序、检验方法(计数)。 第一部分呼吸系统感染的微生物学检验 概述 按解剖结构通常将呼吸道分为上呼吸道和下呼吸道。 上呼吸道包括喉及喉以上呼吸道； 下呼吸道包括气管、支气管和肺泡。 上呼吸道感染细菌学检验 上呼吸道正常菌群种类 上呼吸道感染的常见病原菌 微生物学检查 鼻咽拭子 标本的采集 鼻咽拭子：用无菌棉拭子直接擦拭咽后壁、扁桃体或假膜边缘处。口腔内溃疡用无菌棉拭子直接在溃疡处采集标本。用无菌棉拭子插入鼻孔约2.5cm，接触鼻粘膜采集鼻拭子。 注意：立即送检，防干涸，注意无菌操作，减少杂菌污染。 直接显微镜检查 将脓性物或分泌物标本直接涂于两张洁净的玻片上，一张做革兰染色，另一张根据情况做抗酸染色等其它染色并进行镜检。咽拭、鼻咽部标本的细菌检验应结合临床才有助于临床诊断。 分离培养 细菌鉴定 药物敏感性试验 微生物检验注意事项 1. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多，一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病有关，另外由于接受药物治疗，使某些细菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此，在分析结果时应紧密结合临床。 2. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。 下呼吸道感染微生物学检验 下呼吸道感染常见于细菌性肺炎、支气管炎、肺脓肿、肺结核、真菌、支原体肺炎及病毒性肺炎等。 下呼吸道感染常见病原菌 下呼吸道感染常见病毒： 腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、麻疹病毒等。 标本采集 自然咳痰法：以晨痰为宜，咳前充分漱口，减少口腔正常菌群污染，痰置于无菌容器中送检。 气管镜采集法：于病灶处用导管吸引或气管刷收集，因此法患者较痛苦，不常采用?。 气管穿刺法：主要用于厌氧培养的标本采集。 胃内采痰法：部分结核病人，尤其是婴幼儿患者不会咳嗽，且有时把痰误咽入胃内，清晨空腹时，可采用胃内容物作结核杆菌培养。 *有1/4到1/2的肺部感染病人可能发生菌血症，可同时作血培养。 标本质量的估计 判定是否下呼吸道痰，一般认为合格的痰标本应是含白细胞、脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受污染的痰标本则是来自颊粘膜的扁平鳞状上皮细胞较多。 痰标本培养前应作涂片镜检，白细胞25个/低倍镜视野，而鳞状上皮细胞10个/低倍视野为合格标本。 直接显微镜检查 将痰标本涂片后待干，固定、染色，或直接湿片镜检，对病原学早期、初步诊断有价值。 支气管分泌物等要离心沉淀，以生理盐水适当稀释后,直接涂片染色镜检: 1)正染色法：适用于多种标本及培养物，将标本固定于洁净玻片上直接 染色。常用革兰染色，苏本索一伊红染色(HE)，乳酸酚棉蓝染色，过碘酸锡夫染色(PAS)，嗜银染色(GMS）等; 分离培养与鉴定 一般要求下呼吸道感染培养的细菌浓度应≥107CFU/ml，可视为病原菌，104CFU/ml可视为污染菌。若介于两者之间如105～106CFU/ml时，要连续分离培养两次以上，仍为105～106 CFU/ml时，亦认为是病原菌。 痰培养标本的前处理：一般是用无菌生理盐水将痰洗涤3次，主要是洗去痰中的常居菌，然后向痰液内加入等量的（pH7.6）1%胰酶溶液，放置37℃90min即可使痰液均质化后备用。 分离培养：用处理后的痰接种于血琼脂平板，巧克力琼脂和麦康凯琼脂平板。置于5%～10%CO2中，35℃培养18～24h，观察菌落生长情况，选不同单个菌落作涂片，染色镜检，根据形态特点，作出初步印象，然后按各类细菌的特征做生化鉴定及药敏试验。 如何出报告? 特定的致病菌和正常菌 上呼吸道：百日咳鲍特菌、白喉棒状杆菌（法定报告的传染病）、A群化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌 下呼吸道：肺炎支原体、军团菌、双相型真菌、Tb 初级报告：涂片染色镜检的描述性报告（发现有诊断价值时应及时报告） 最终报告：包括肉眼观察送检标本的记录、涂片革兰染色细胞学和镜检的描述性报告、分离致病菌的鉴定结果、药敏试验和评述性建议等，同时根据三区划线细菌生长情况报告细菌半定量的量化指标。 三区划线细菌生长菌落量化指标：纯培养、大量、中等量、少量和个别 临床意义 1.