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蛋白质的生物合成（翻译） 三、高级结构的修饰 （一）亚基聚合 （二）辅基连接 （三）疏水脂链的共价连接 四、蛋白质合成后的靶向输送 N-端：带正电荷的碱性氨基酸残基 中段：疏水核心区 C-端：加工区，一些极性相对较大、侧链较短的氨基酸 裂解位点：信号肽酶作用位点 信号肽识别颗粒 (signal recognition particle, SRP) SRP对接蛋白 (docking protein, DP) 信号肽 (signal peptide)：新生分泌性蛋白质中可被细胞转运系统识别的保守特征性氨基酸序列。 信号假说 信号肽识别颗粒 (signal peptide recognition particles, SRP) 对接蛋白 (docking protein, DP) 1. SRP识别信号肽 2. SRP把核蛋白体带到膜内侧面 3. SRP与DP识别、结合 4. 膜通道开放，信号肽带动合成的蛋白质沿通道穿过膜 5. 信号肽再沿通道折回时被膜上的信号肽酶切除，成熟的蛋白质被分泌到膜外 （一）起始 指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物的过程。 1. 核蛋白体大小亚基分离； 2. mRNA在小亚基定位结合； 3. 起始氨基酰-tRNA的结合； 4. 核蛋白体大亚基结合。 IF-3 IF-1 1. 核蛋白体大小亚基分离 A U G 5 3 IF-3 IF-1 2. mRNA在小亚基定位结合 原核生物mRNA在核蛋白体小亚基上的准确定位和结合涉及两种机制： S-D序列，核蛋白体结合位点 在各种mRNA起始AUG上游约8~13核苷酸部位，存在 一段由4~9个核苷酸组成的一致序列，富含嘌呤碱基， 如-AGGAGG-，称为S-D序列。 小亚基中的16S rRNA 3?-端有一富含嘧啶碱基的短序列， 通过与S-D序列碱基互补而使mRNA与小亚基结合 mRNA序列上紧接S-D序列后的小核苷酸序列，可被核蛋白体小亚基蛋白rpS-1识别并结合。 IF-3 IF-1 IF-2 GTP 3. 起始氨基酰tRNA结合到小亚基 A U G 5 3 fMet-tRNAfMet IF-3 IF-1 IF-2 GTP GDP Pi 4. 核蛋白体大亚基结合，起始复合物形成 A U G 5 3 （二）延长 指在mRNA模板的指导下，氨基酸依次进入 核蛋白体并聚合成多肽链的过程。 1. 进位 (positioning)/注册 (registration) 2. 成肽 (peptide bond formation) 3. 转位 (translocation) 肽链延长在核蛋白体上连续循环式进行， 又称为核蛋白体循环，包括以下三步： 每轮循环使多肽链增加一个氨基酸残基。 1. 进位 又称注册 (registration) 是指一个氨基酰-tRNA按照mRNA模板的指令进入并结合到核蛋白体A位的过程。 进位需要延长因子 EF-Tu与EF-Ts参与。 2. 成肽 成肽是在转肽酶 (peptidase)的催化下，核蛋白体P位上起始氨基酰-tRNA的N-甲酰甲硫氨酰基或肽酰-tRNA的肽酰基转移到A位并与A位上氨基酰-tRNA的?-氨基结合形成肽键的过程。 成肽的反应过程 3. 转位 转位是在转位酶的催化下，核蛋白体向mRNA的3-端移动一个密码子的距离，使mRNA序列上的下一个密码子进入核蛋白体的A位、而占据A位的肽酰-tRNA移入P位的过程。 EF-G有转位酶 (translocase)活性，可结合并水解1分子GTP，释放的能量促进核蛋白体向mRNA的3侧移动，使起始二肽酰-tRNA-mRNA相对位移进入核蛋白体P位，而卸载的tRNA则移入E位。 转位需要延长因子EF-G参与。 进位 转位 肽链合成延长过程 成肽 （三）终止 指核蛋白体A位出现mRNA的终止密码子后， 多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核蛋白体大、小亚基等分离的过程。 终止阶段需要释放因子RF-1、RF-2和 RF-3参与 RF-3可结合核蛋白体其他部位，有GTP酶活性， 能介导RF-1、RF-2与核蛋白体的相互作用。 释放因子 (RF)的功能 识别终止密码子 RF-1特异识别UAA、UAG； RF-2特异识别UAA、UGA。 诱导转肽酶转变为酯酶活性 催化新生肽链与结合在P位的tRNA之间的酯键水解，使肽链从核蛋白体上释放。 原核肽链合成终止过程 （四）多聚核蛋白体 (polysome) 多聚核蛋白体的形成可以使蛋白质生物合成以高速度、高效率进行。 1条mRNA模板链都可附着10~100个核蛋白体，这些核蛋白体依次结合起始密码子并沿5→3方向读码移动，同时进行肽链合成，这种mRNA与多个核蛋白体