热毒宁注射液对细菌内毒素性脂多糖致热大鼠解热作用研究.docVIP

热毒宁注射液对细菌内毒素性脂多糖致热大鼠解热作用研究 　　[摘要]该实验观察热毒宁注射液（RDN）对细菌内毒素性脂多糖（LPS）发热大鼠的解热作用及对中枢发热介质的影响。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、安乃近组、热毒宁注射液高、低剂量组（12，6 mL·kg-1）。除对照组外， 所有大鼠均腹腔注射脂多糖（LPS， 80 μg·kg-1）观察各组体温变化，并采用双抗体夹心ELSIA法测定发热高峰大鼠下丘脑中环磷酸腺苷（cAMP）含量和肺组织中髓过氧化物酶（MPO）含量。热毒宁注射液高剂量组能明显降低发热大鼠体温的升高程度， 并且能够降低发热大鼠下丘脑中cAMP含量和肺组织中MPO含量。热毒宁注射液有明显的解热作用，其作用机制可能主要与减少下丘脑中cAMP含量和肺组织中MPO含量有关。 　　[关键词]热毒宁注射液；解热；cAMP；MPO 　　发热是指机体在致热原的作用下，激活体内的单核巨噬细胞产生内生致热原（EP）作用于下丘脑体温调节中枢，使产热增加，散热减少而引起的调节性体温升高[1]，是外周免疫系统和中枢共同作用的结果[2]。热毒宁注射液是提取栀子、青蒿、金银花中的有效组分制备而成的复方中药制剂，临床用于治疗急性上呼吸道感染外感风热证。金银花对酵母和内毒素所致大鼠发热与2，4-二硝基苯酚所致小鼠发热有明显的解热作用，并且能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀[3-5]。青篙[6]与其他药物配伍治疗SARS病人高热不退具有良好的效果，且青蒿中东莨菪内酯（scopoletin）对正常体温及内毒素性发热家兔体温均有显著的降低作用[7]。临床上热毒宁注射液具有治疗外感风热的功效[8]。本实验观察热毒宁注射液对细菌内毒素性脂多糖（LPS）发热大鼠的解热作用，并探讨其可能的解热作用机制，为其临床应用提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 SPF级SD大鼠，雄性， 体重（200±20） g，由广东省实验动物监测所提供，生产许可证号SCXK（粤）2006-0015。饲养环境：室温（23±2） ℃，相对湿度（60±10）%，正常饲养3 d后供试。 　　1.2 试剂及仪器 热毒宁注射液由江苏康缘药业股份有限公司提供，批号100906。热毒宁注射液的化学组成通过高效液相色谱法（药典2005年版一部附录VI D）测定，HPLC指纹图谱由姚新生院士课题组提供。化合物结构的鉴定使用分光光度计（Waters，USA），质谱仪（Bruker，USA），核磁共振分光仪（Bruker，USA）。热毒宁注射液中包含10种主要的化合物，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、断马钱子酸、咖啡酸、栀子苷、断氧马钱子苷、 异绿原酸B、异绿原酸C和异绿原酸A， 绿原酸和栀子苷为其解热作用的有效成分。安乃近注射液购自天津药业焦作有限公司，批脂多糖（LPS）购自Sigma公司，批号13H4048。cAMP ELISA试剂盒购自美国ADL公司。MPO试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 　　体温计产自上海华辰医用仪表有限公司；冷冻离心机为德国Sartorious公司产品；酶标仪为芬兰Thermo Labsystems公司产品。 　　1.3 动物的筛选 SD大鼠在试验环境中适应3 d，自由进食饮水。实验前3 d将大鼠置于实验环境中摸拟实验操作（包括捉拿、固定、安放温度计）以使其适应实验条件，每日用体温计测肛门温度2次（体温计插入肛门2 cm，测定温度时挤出粪便），选取体温变化不超过0.5 ℃的大鼠作为实验用动物[9]。 　　1.4 大鼠LPS所致发热模型的建立 将合格大鼠（体温变化不超过0.5 ℃的大鼠）随机分为对照组和LPS发热组，每组6只。用无菌生理盐水将LPS 配置成80 μg·kg-1经腹腔注射入大鼠体内，对照组大鼠腹腔注射等体积的无菌生理盐水作为空白对照，注射LPS开始持续观察并记录大鼠体温变化，每1 h测定体温1次，连续测定10 h，记录2组大鼠体温的变化（ΔT， ℃）。 　　1.5 动物分组、给药及体温变化的测定 将合格大鼠（体温变化不超过0.5 ℃的大鼠）随机分为5组，每组10只：正常对照组、模型组、安乃近阳性对照组、热毒宁注射液高、低剂量组（12，6 mL·kg-1，相当人临床等效剂量4，2倍）。各组给药组大鼠通过腹腔注射给予药物，模型组给予等体积无菌生理盐水。给药1 h后，除空白组外所有大鼠均腹部注射 LPS 80 μg·kg-1，空白组给予等体积无菌生理盐水。注射LPS开始持续观察并记录大鼠体温变化，每1 h记录体温1次，连续记录7 h，以每1 h的动物体温与基础体温的差值（ΔT， ℃）为观察指标。 　　1.6 下丘脑cAMP和肺脏MPO含量测定 发热高峰6 h腹腔注射10%水合氯醛使大鼠麻醉，断头法处死，于冰浴下迅速取出肺脏及全脑，于视交叉