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波棱素脂质体制备工艺及处方优化研究 　　[摘要]波棱素是波棱瓜子中的木脂素分离出来的活性单体成分，其具有抗肝损伤、抑制乙型肝炎病毒复制的作用。该实验首次采用薄膜分散法成功制备了波棱素脂质体，以包封率为指标，对处方工艺进行优化。优化后的最佳膜材处方为波棱素-大豆磷脂-胆固醇 2.44∶78.05∶19.51，选用0.5%普流尼克（F68）溶液50 ℃下进行水合脱膜，并水浴超声时间20 min，制备得到的波棱素脂质体平均包封率为（94.50±2.15）%，粒径（119.2±10.7） nm，达到试验预期，这将为后期的肝靶向给药系统的研究奠定基础。 　　[关键词]波棱素；脂质体；制备工艺；处方优化 　　波棱瓜子系葫芦科波棱瓜属植物波棱瓜Herpetospermum caudigerum Wall.的干燥成熟种子[1]。它是常用的藏药，主治肝炎、胆囊炎等疾病，亦有治疗消化不良、清热解毒之功效[2-3]。波棱素（herpetin， HPT）是波棱瓜子中的木脂素分离出来的活性单体成分，药理学活性研究表明，其具有抗肝损伤、保肝降酶、抑制乙型肝炎病毒复制的作用[4]。HPT在水中的溶解度很低（≈0.1 g?L-1），为了增加HPT溶解度并提高其肝脏靶向性，本研究将HPT制成脂质体并优化了制备工艺，为后期研究奠定基础。 　　1 材料 　　Acquity型超高效液相色谱（美国Waters公司）；JEM-100CX透射电子显微镜（日本JEOL公司）；Zetasizer Nano ZS90型激光粒度及电位分析仪（英国Malvern公司）；BS210S电子天平（德国Sartorius公司）。波棱素对照品（自制，纯度98.59%）；波棱素结晶（自制，纯度95%）；大豆卵磷脂，蛋黄卵磷脂（德国Lipoid公司）；胆固醇（美国Sigma公司）；0.5 mL超滤离心管（10 kDa）（Millpore公司）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。 　　2 方法与结果 　　2.1 HPT脂质体包封率的测定 　　2.1.1 色谱条件 采用UPLC测定样品HPT的含量，计算脂质体的包封率。色谱条件如下：采用C18 BEH色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），流动相乙腈-2%冰醋酸（24∶76）[5]，流速0.6 mL?min-1，柱温30 ℃，检测波长280 nm，进样体积5 μL。色谱图见图1。 　　2.1.2 线性范围 精密称取HPT对照品适量，加入甲醇超声溶解，定容得到1.00 g?L-1的对照品储备液。精密量取储备液适量，分别置于量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配置得到质量浓度分别为2.0，4.0，10.0，20.0，40.0，100.0 mg?L-1的工作液，采用UPLC分析，测定峰面积值。将峰面积（Y）和浓度（X）进行回归，得到回归方程Y=10 976X-22 391，r=0.999 9，HPT在2.0～100.0 mg?L-1线性关系良好。 　　2.1.3 回收率及精密度试验 精密量取已知含量的样品溶液9份，分别加入高、中、低3种浓度的HPT对照品溶液，经过测定，平均回收率分别为102%，99.5%，96.8%，日内精密度RSD 2.3%，日间精密度RSD 4.6%。 　　2.2 超滤法测定包封率 　　2.2.1 超滤法对空白脂质体的回收率 取空白脂质体溶液适量，经超滤离心后收集滤液，用定磷法测定磷含量。结果未检测到磷，说明脂质体全部被截留。 　　2.2.2 超滤法对游离药物的回收率 分别取HPT对照品溶液4.0，20.0，80.0 mL经超滤离心后，测定滤液中的HPT含量，计算回收率。结果显示回收率均大于95%，说明超滤膜对HPT几乎无吸附作用。 　　2.2.3 超滤法测定脂质体包封率 量取HPT脂质体溶液0.5 mL，置于Millpore超滤管中，4 000 r?min-1离心10 min后收集滤液，按2.1.1项下方法测定峰面积，用外标一点法计算HPT含量，记为W1；另精密量取HPT脂质体溶液0.5 mL，加入甲醇超声10 min后定容，摇匀，同法测定HPT含量，计为W2，根据下列公式计算包封率：包封率（EE）=（1-W1/W2）×100%。 　　2.3 HPT脂质体制备方法的选择 　　以HPT脂质体的稳定性、粒径大小及包封率为指标，按照相同的处方量，分别按照薄膜分散法、注入法、逆相蒸发法制备脂质体，筛选适宜的制备方法。结果见表1，综合考虑HPT脂质体的稳定性、粒径大小及包封率，最终选择薄膜分散法制备HPT脂质体。 　　2.4 均匀设计优选HPT脂质体膜材处方 　　处方以大豆磷脂、胆固醇、HPT 3种成分组成，以三者在其变量范围内的百分含量作自变量，分别设为X1，X2和X3，以HPT脂质体的包封率为指标，采用带约束的混料均