4种DNA提取方法在陈旧骨骼DNA检测中性能评价.docVIP

4种DNA提取方法在陈旧骨骼DNA检测中性能评价 　　摘要：目的：对陈旧骨骼DNA检测中运用4种DNA提取方法的性能进行评价，寻找出从陈旧骨骼中提取DNA的有效提取方法。方法：运用传统的有机结合Microcon100纯化柱法，硅珠法，磷酸盐缓冲方法以及promega公司骨骼孵育液方法对陈旧骨骼DNA进行检测。结果：对采用四种DNA提取方法可取到得陈旧骨骼DNA运用常规的荧光标记复合STR基因分型法进行成功分析。结论：四种DNA提取方法在陈旧骨骼DNA检测中，提取陈旧骨骼DNA都取得了良好的效果。 　　关键词：Microcon100纯化柱法；硅珠法；磷酸盐缓冲法；promega骨骼孵育液法；陈旧骨骼DNA；性能评价 　　Four kinds of DNA extraction methods in old bone DNA testing in performance evaluation 　　Wang He Wang Yi’nan Chu Zheng Shi Jinwei 　　Abstract：Objective： to test old bone DNA using 4 kinds of DNA extraction methods， and find out the most effective one by performance evaluation. Methods： using the organic combination of traditional Microcon100 purification column method， silicon bead method， phosphate buffer method and promega company bone incubation solution method for old bone DNA testing. Results： to use four kinds of DNA extraction method preferable to have old bone DNA using conventional fluorescent marker composite STR genetic parting method for the successful analysis. Conclusion： four kinds of DNA extraction methods in old bone DNA detection， extraction old bone DNA has achieved good effect. 　　Key words： Microcon100 purification column method； Silicon bead method； Phosphate buffer method； promegaBone incubation liquid method； Old bone DNA； Performance evaluation 　　【中图分类号】R379 【文献标识码】A 【文章编号】1674-7526（2012）12-0500-02 　　在法医实践研究中，对于有关DNA的检验已经成为对个体进行识别鉴定的常规技术之一。骨骼是一种比较特殊的生物检测材料，因为外部有坚硬的保护组织，所以相对于人体的其他组织脏器器官的降解比较慢。但对于高度腐化及白骨化的样本来说，骨骼是进行DNA检测的有效检测材料之一，由于骨骼组织特殊的结构和环境对其的影响，促使提取骨骼DNA显得更加困难。本文运用四种方法提取骨骼DNA并取得了良好的检测性能，现将方法结果报告如下： 　　1 一般资料 　　1.1 资料与方法 　　（1）材料：骨骼样本96根，均来自于本院日常送检的案件。骨骼时限0.5年至30年，送检骨骼包括股骨、肱骨以及肋骨等，现场的环境有泥土的掩埋，水中的浸泡以及焚烧等。 　　1.2 方法 　　（1）样本处理：将样本96根骨骼，随机分成4份，每份24份。使用手术刀将每份样品表面的污垢杂质清理干净，再用蒸馏水冲洗后晾干，经液氮研磨成小块后，电锯锯取所需的骨粉。 　　（2）骨骼DNA提取4种方法 　　传统的有机结合Microcon100纯化柱法：取所需骨粉装于试管中并加入适量的EDTA溶液浓度，均匀搅拌，每12小时进行一次脱钙，共计3次，未去除上清每次采用无菌水进行清洗，在沉淀渣中加入适量的裂解溶液，抽取Microcon100纯化柱纯化浓缩液对DNA进行回收。 　　硅珠法：将骨粉用去离子水、乙醇浸泡并晾干。取骨粉5g，加入适量的EDTA（0.5mmon/L）溶液，搅拌均匀放于摇床上进行脱钙12小时，再用去离子水清洗2遍，去除上清，反复4次