HPLC法测定周氏方黄酮部位异槲皮苷和黄芩苷含量.docVIP

HPLC法测定周氏方黄酮部位异槲皮苷和黄芩苷含量 　　[摘要] 目的 定量分析周氏克金岩方（周氏方）中黄酮部位异槲皮苷和黄芩苷的含量，为制订周氏方质量标准提供依据。 方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Platisil ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温30℃，流速1.0 mL/min。流动相为乙腈-0.1%醋酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为270 nm。 结果 异槲皮苷和黄芩苷线性范围分别为0.536～4.020 μg（r = 0.9990）、0.285～2.850 μg（r = 0.9999）；平均加样回收率分别为100.92%和101.97%（n = 6）。周氏方黄酮部位中异槲皮苷和黄芩苷的平均含量分别是1.13%和0.25%。 结论 本方法简便易行，结果准确可靠，适用于周氏方有效部位异槲皮苷和黄芩苷的含量测定及质量控制。 　　[关键词] 周氏方；异槲皮苷；黄芩苷 　　[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）04（c）-0103-03 　　沙参麦冬汤出于清代吴鞠通《温病条辨》，是治疗肺胃阴虚的代表方，对原发性肺癌、食管癌等有显著作用[1]。周氏克金岩方（周氏方）是周仲瑛教授的临床经验方，为沙参麦冬汤的类方。经过数十年的临床观察与治疗表明具有显著的抗肺癌作用。周氏克金岩方主要由祛痰、解毒、化瘀、养阴药四组共计13味药组成，主要由麦冬、沙参、红花、鱼腥草、仙鹤草、山慈菇、半夏、苏木、玉竹、猫爪草、金荞麦等药材组成。各味药主要含有皂苷、黄酮、多糖等成分[2]。其中黄酮类化合物是具有活性的重要部分。方中含黄酮类成分的主要药材有金荞麦[3]、仙鹤草[4]、鱼腥草[5]、红花[6]等。周氏方黄酮部位中主要黄酮成分为异槲皮苷和黄芩苷，研究表明异槲皮苷[7-8]和黄芩苷[9-10]具有抗癌活性。周氏方临床的抗肺癌疗效较好，经前期筛选得到黄酮有效部位[11]。本研究在筛选出周氏方抗肺癌有效部位的研究基础上，进行有效部位中黄酮成分的定量分析研究，为制订其质量标准提供理论依据。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　Agilent 1100高效液相色谱仪（美国），MettlerAE204型电子分析天平。 　　1.2 试剂 　　石油醚，乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等试剂为分析纯；重蒸馏水（娃哈哈纯水）， 浓硫酸（上海化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，德国Merck公司），甲醇（色谱纯， 德国Merck公司）。 　　1.3 药材 　　麦冬（Ophiopogonjaponicus）、沙参（Adenophora tetraphylla）、猫爪草（Ranunculus ternatus）、仙鹤草（Hairyvein Agrimonia Herb Extract）、红花（Carthamus tinctorius L.）、玉竹[Polygonatum odoratum（Mill.）Druce]等均购自于安徽铜陵中药饮片有限公司，由南京中医药大学鉴定教研室吴德康教授鉴定。 　　1.4 对照品 　　异槲皮苷对照品，自制。黄芩苷对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号：110715-200514。 　　2 方法与结果 　　2.1 周氏方黄酮部位样品 　　全方药材粗粉（4倍处方量472 g），用70%乙醇浸泡1 h，回流1.5 h，过滤，收集滤液，共提取3次。合并滤液、浓缩，减压回收至滤液无醇味，将滤液分别用石油醚、乙酸乙酯萃取后，用正丁醇萃取7次，将萃取的正丁醇部分用70%的乙醇溶解，蒸干，用甲醇定容到20 mL，得正丁醇部位。取一定量的正丁醇萃取液，蒸干后用纯水溶解，用10%的硫酸调节pH至2，静置24 h。离心，沉淀部分用70%乙醇定容至100 mL，浓度为0.6520 g生药/mL。分别取5份乙醇液，蒸干，得黄酮部位，重量分别为0.3910、0.3850、0.3875、0.3720、0.3950 g，用甲醇定容至5 mL[11]。 　　2.2 对照品制备 　　精密称取异槲皮苷3.350 mg，用纯甲醇定容至5 mL，浓度为0.6700 g/mL，取一定量用甲醇稀释至0.2680 μg/μL，作为对照品溶液Ⅰ。 　　精密称取黄芩苷5.700 mg，用60%甲醇定容至10 mL，浓度为0.5700 g/mL，取一定量用甲醇稀释至0.1425 μg/μL作为对照品溶液Ⅱ。 　　2.3 色谱条件 　　色谱柱为Platisil ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流速为1.0 mL/min；检测波长270 nm；柱温30℃。流动相为乙腈和1%醋酸水溶液，梯度洗脱。在此色谱条件下，测定异槲皮苷、黄芩苷对照品、周氏方黄酮部位供试液，色谱图见图1。 　　由图1可见，周氏方黄酮部位溶液中