核酸检测技术2014课件.pptVIP

HIV核酸检测及婴幼儿诊断;HIV核酸检测的意义;疑难样本的辅助诊断 在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断，但在特殊情况下，单纯HIV抗体检测结果不能进行明确的诊断，如在感染早期或疾病终末期出现抗体不确定反应时，RNA的测定结果可帮助提供HIV感染早期或终末期的证据。由于试剂的灵敏度、接受有效的抗病毒治疗后以及存在长期低水平病毒的少数感染者等原因，应对其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。;遗传变异监测 可用于HIV分子流行病学监测，包括HIV-1和HIV-2感染的鉴别诊断、HIV感染传播链的分析、HIV基因亚型和重组病毒的鉴定和分析以及人群HIV遗传变异趋势的监测;耐药性监测 可用于HIV耐药检测和监测，指导公共卫生医生了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断抗病毒治疗效果和修改抗病毒治疗方案。;;;样本采集原则;样品的采集;血浆中RNA量比血清中高并稳定。 全血中病毒载量非常不稳定。 EDTA抗凝的RNA比肝素、ACD好，并且肝素对PCR扩增有抑制作用。（用ACD抗凝的样品检测结果大约会比EDTA抗凝的样本低15％) 采集的样品应在4～8小时以内分离血浆。;样品的保存;样品的运送;实验室设置原则;;要点：;;;;;;;试剂配制;核酸提取;加样和扩增;扩增产物分析;结果判定和报告;;常用的病毒载量测定方法;;关于不同HIV定量检测方法的选择; 提高敏感性的方法 ? 增加标本用量，例如从500 μl 血浆增加到1 ml ? 离心沉淀病毒颗粒，离心时间从60min 延长到 80 min at 23,600 x g ? 减少内部定量标准的体积，例如从 25 μl 减少到 6.6 μl per lysis vial ? 减少沉淀的病毒重悬的体积，例如从 100 μl减少到 55 μl ? 加底物孵育时间延长10–15 min;假阳性(False Positive) 控制污染 　物理隔离PCR前后的反应 　器械专用（加样器、吸头、离心机、离心管、手　　　套、工作服、笔） 　分装试剂 　阳性和阴性对照 最近的进展 　防气溶胶吸头 　半自动操作 　封闭试管系统（实时PCR） 　全自动（样品处理＋扩增＋检测） ;假阴性(False Negative) 原因 　序列变异 　丢失核酸样本 　核酸样品被消化 　抑制DNA聚合酶的活性 预防 　避免肝素、血红蛋白、乙醇、酚、SDS 　使用合适的提取技术 检测 　阳性对照 　内部对照 ;选择病毒载量检测的注意事项;病毒载量测定的基本要求; 婴幼儿HIV感染核酸检测 ;适用范围;检测程序及结果报告 ;滤纸片载体及其特性（1）;滤纸干血斑样本特点（1）;滤纸片载体及其特性（2）;滤纸片干血斑作为一种有效载体在HIV检测中具有非常重要的作用;HIV耐药检测;抗病毒治疗的效果：  ●大幅度降低病毒载量 ●提升CD4细胞数 ●改善症状，延长生存期。;什么是HIV耐药性？;Available Antiretroviral Agents;药物的作用机制;药物的作用机制;药物的作用机制;耐药性是怎么产生的？;耐药性是怎么产生的？;哪些因素促使耐药性病毒株出现？;HIV-1耐药检测的意义;如何检测耐药株？;表型检测方法;表型耐药性检测;HIV基因型耐药性检测;基因型检测方法（序列测定法）;标本;病毒RNA提取（Qiagen公司试剂盒）;核酸扩增类试剂的操作主要步骤;HIV-1耐药基因型解释系统;耐药性突变记分;HIV-1耐药性检测的临床指征;HIV-1耐药性检测的临床指征;耐药性检测结果的解释; 耐药检测在临床中应用 ;儿童HIV感染的诊断;儿童感染HIV的途径;儿童艾滋病的流行病学特点;儿童HIV/AIDS诊断;儿童HIV/AIDS诊断;;儿童HIV感染的诊断方法;儿童HIV感染的诊断方法;核酸检测流程;;儿童HIV感染的排除诊断;儿童HIV感染发生阶段的判断;