高效液相色谱法快速测定糕点中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠.docVIP

高效液相色谱法快速测定糕点中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠 　　摘要：建立了采用高效液相法同时测定糕点中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法。通过大量实验确定了对糕点中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠经过前处理后，过0.45um超滤膜，经高效液相色谱C18柱的分离，紫外检测器于230nm处检测，柱温：40℃，以甲醇和乙酸铵（0.02mol/L）5：90为流动相，流速为1ml/mim，保留时间定性，峰面积定量。锝到谱图分离效果良好，检出限浓度低，精密度高，线性好，加标回收率高，符合色谱检测的要求，提高了工作效率。 　　关键词：高效液相色谱法 糕点 安赛蜜 苯甲酸 山梨酸 糖精钠 　　近年来，由于消费者对于食品的安全性日益关注，食品中的各种添加剂，特别是人工和成防腐剂（苯甲酸、山梨酸）和甜味剂（安赛蜜，糖精钠）的使用情况原来用受到人们的重视。由于防腐剂、甜味剂都有一定的毒性，过量摄入会对人体带来伤害，还有可能引发癌症。在我国食品添加剂使用卫生标准（GB2760-2011）中对这些添加剂的适用范围和最大使用了都有明确规定。而各种食品添加剂的检测方法各不相同，如GB/T5009.28-2003《食品中糖精钠的测定》、GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的侧定高效液相法》、GB/T5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》等方法各种检测方法的样品前处理及检测仪器条件有一些区别，在日常检验工作中常需要同时检测糕点几种添加剂，若分别检测，不但延长时间，增加工作量，还降低了工作效率。为此本文建立了高效液相法同时测定糕点在安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法，并同时确定其测定时的最佳条件。 　　1、材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　高效液相色谱仪（岛津 LC-20AT 配紫外检测器） 　　离心机（上海安亭科学仪器厂） 电子天平（AUY120 岛津） 　　高速组织捣碎机（北京中兴伟业伟器有限公司） 　　苯甲酸标准储备液1mg/ml、山梨酸标准储备液1mg/ml、糖精钠标准储备液1mg/ml、安赛蜜标准储备液1mg/ml（中国计量科学研究院） 　　甲醇：色谱纯；乙酸铵溶液：0.02mol/L，取1.54克乙酸铵，加1000ml高纯水容解，经0.45um滤膜过滤；亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾加水至1000ml；乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加30ml冰乙酸，加水稀释至1000ml。 　　1.2方法 　　1.2.1 样品的处理 称取一定量的样品（经过高速组织捣碎机粉碎后）2-5g，于50ml的离心管中，加入30ml左右的水，如果该样品中含蛋白质较多，应分别加入2.5ml乙酸锌和2.5ml亚铁氰化钾来沉淀蛋白质，最后以水定容至50ml，混匀在离心机中离心沉淀，静置分层后取上清液过0.45um超滤膜，收集滤液于高校液相色谱测定。 　　1.2.2 色谱条件 色谱柱：C18（150mm*4.6mm，3um）流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵（5：95）柱温40℃ 　　流速：1ml/mim；检测器：紫外检测器；检测波长：230nm。 　　1.2.3 标准的测定 标准的配置：分别取浓度均为1mg/ml的苯甲酸、山梨酸、糖精钠，安赛蜜储备液配制成20、40和80ug/ml的标准使用液测定。 　　2、结果与讨论 　　2.1流动相的选择 　　本文选择甲醇和0.02mol/l乙酸铵溶液作为流动相。甲醇和乙酸铵在流动相中比例的少量变化都会影响各组分的出峰情况。进过大量实验确认，当甲醇+乙酸铵（0.02mol/l）=10+9时，糖精钠于山梨酸分离效果不好，会有重叠。当流动相为甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）=2+9时，安赛蜜与苯甲酸分离不好，且分离时间长。而在甲醇+乙酸铵（0.02mol/L）=5+95时，其灵敏度好于其他三种流动相，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸及糖精钠完全分离。 　　2.2柱温的选择 　　柱温对样品的分离和保留时间有一定的影响，在柱温30℃时，室温时，其谱峰分离效果不好，重复性实验不好。当柱温为40℃，有利于提高灵敏度，缩短分析时间，且各峰分离良好，重复性实验良好。 　　2.3波长的选择 　　GB/T23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的侧定高效液相法》和GB/T5009.28-2003《食品中糖精钠的测定》中规定的波长为230nm ，GB/T5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》规定的波长为214nm，在这两个波长下进行实验发现在波长230nm下，各组分均有好的分离度。 　　2.4流速的旋转： 　　流速改变导致保留时间改变，流速降低，色谱峰被展宽，峰面积变大，对于经常用到的2ml/mim，1ml/min。分别进行多次实验发现1ml/min的标准曲线在出峰时间，