基于GC―MS和UPLC―Q―TOF―MS麻黄汤化学成分识别.docVIP

基于GC―MS和UPLC―Q―TOF―MS麻黄汤化学成分识别 　　[摘要] 复方汤剂成分复杂，需要寻找一个高分离度、高稳定性的分析方法进行定性分析。采用梯度萃取法，将麻黄汤水煎液中的化学组分分为脂溶性和水溶性成分进行定性分析。采用GC-MS技术分离麻黄汤乙酸乙酯提取部分化学成分，质谱使用EI离子源，通过NIST MS Search 2.0标准质谱库定性分析，并结合相关文献资料，共鉴定出40个化学成分；采用UPLC-Q-TOF-MS技术分离麻黄汤水提取部分化学成分，质谱使用ESI离子源，通过MZmine-2.9.1，Isotope Pattern软件以及质谱裂解规律定性分析，并对照对照品和结合相关文献资料，共鉴定出39个化学成分。该实验利用了GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS对化学成分分析范围的差异，以及MS对未知化合物的准确鉴定优势，为麻黄汤药效物质的研究提供了依据，并为复方组分提供了一种简单快捷的分析鉴定方法。 　　[关键词] 麻黄汤；乙酸乙酯部分；水提取部分；GC-MS；UPLC-Q-TOF-MS 　　麻黄汤，始载于张仲景所著《伤寒论?辨太阳病脉症并治法》，由麻黄、桂枝、杏仁、甘草组成，具有辛温发汗，宣肺平喘的功效，原用于太阳伤寒表实证（或称外感风寒表实证）。现代主要用于上呼吸道感染、流感、急性支气管炎、支气管哮喘等[1]。已知麻黄含有生物碱、黄酮、鞣质、挥发油、有机酸、多糖等成分[2]，桂枝含有酚类、有机酸、多糖、苷类、甾体、香豆素等成分[3]，苦杏仁含有杏仁油、苦杏仁苷、挥发油等成分[4]，甘草含有黄酮类和三萜皂苷类等成分[5-7]。复方汤剂复杂，是由多味药材或多个化学成分而组成的，故需要寻找一个高分离度、高稳定性和准确度高的多组分分析方法对复方的化学组分定性分析。参照三元论结构分析法[8]，视复方为一个整体，根据各药味化学成分的理化性质，采用适宜的分离纯化方法，获得几个不同极性的部位，分别采用适宜的分析方法进行化学分析。本实验根据化学成分的溶解性，分为脂溶性成分和水溶性成分，采用梯度萃取法。对麻黄汤乙酸乙酯部位采用GC-MS（气相色谱-质谱联用仪）分析，通过Agilent MSD工作站NIST标准质谱图库进行检索并参照同位素原则和结合文献资料，共鉴定出包括挥发油类、香豆素类等40种化学成分；对麻黄汤水层部位采用UPLC-Q-TOF-MS（超高效液相色谱-质谱联用仪）分析，通过准分子离子峰和质谱裂解规律并结合文献资料或与部分对照品对照，共鉴定出包括生物碱类、黄酮类、皂苷类、有机酸类等39种化合物。为下一步的药效物质基础的研究提供了化学依据，并为复方组分的定性分析提供了一种简单快捷的方法。 　　1 材料 　　1.1 试剂与仪器 　　乙酸乙酯（色谱纯，天津市福晨化学试剂厂，乙酸乙酯（分析纯，成都市科龙化工试剂厂，甲醇（色谱纯，Fisher scientific LOT：111280），乙腈（色谱纯，Fisher scientific LOT：096328），水均为超纯水；盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、甘草次酸、桂皮酸对照品均购自于中国食品药品检定研究院，甘草酸、苦杏仁苷、毛蕊异黄酮、甘草苷对照品均购自于成都瑞芬思生物科技有限公司；气相色谱-质谱联用仪（Agilent 7890A-5975C msd）；micr-OTOF-QⅡ质谱仪（德国Bruker公司），Agilent 1200快速液相（配有在线脱气机，二元泵，自动进样器及柱温箱，美国Agilent公司）；涡旋仪（上海沪西分析仪器有限公司）、BP121S电子天平（德国Sartorius公司）、离心机（上海安亭科学仪器厂），恒温水浴锅（北京国华医疗器械厂）。 　　1.2 药物 　　药材均购自于成都荷花池中药材市场，经成都中医药大学药学院王光志副教授鉴定，麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica的干燥草质茎；桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia的干燥嫩枝；苦杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armeniace var. ansu的干燥成熟种子；甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis的干燥根和根茎。 　　2 方法 　　2.1 GC-MS色谱/质谱条件 　　2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent 19091S-433（325 ℃，0.25 μm×250 μm×30 m）；进样口温度250 ℃，接口温度230 ℃；不分流模式；载气为氦气，流速为1 mL?min-1；压力52.761 9 kPa；进样量1 μL，升温程序：初始温度50 ℃，保持3 min，然后以1.5 ℃?min-1升到100 ℃，保持10 min，再以2 ℃?min-1升到160 ℃，保持10 min，最后以5 ℃?mi