交泰丸对2型糖尿病大鼠胰腺脂肪沉积和胰岛细胞凋亡影响.docVIP

交泰丸对2型糖尿病大鼠胰腺脂肪沉积和胰岛细胞凋亡影响 　　[摘要] 该研究采用小剂量链脲佐菌素（STZ）尾静脉注射和高脂饮食8周建立大鼠T2DM模型，给予交泰丸治疗，检测葡萄糖耐量试验（OGTT）、空腹胰岛素（FINS）、游离脂肪酸（FFA）、血脂，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），胰腺组织病理学检查，脂质抽提法检测胰腺组织甘油三酯（TG）含量，原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法（TUNEL）法检测胰岛细胞凋亡情况。结果显示，模型组OGTT异常，FINS，HOMA-IR，FFA升高，血脂紊乱，胰腺组织见明显脂肪沉积，胰腺组织TG含量明显升高，胰岛细胞凋亡增加；与模型组比较，交泰丸组OGTT改善，FINS，HOMA-IR，FFA下降，血脂紊乱好转，胰腺组织脂肪沉积减少，胰腺组织TG含量明显下降，胰岛细胞凋亡减少。综上所述，交泰丸可有效治疗大鼠T2DM，其机制可能与减少胰腺脂肪沉积和胰岛细胞凋亡有关。 　　[关键词] 交泰丸；2型糖尿病；脂肪沉积；胰岛细胞；凋亡 　　[收稿日期] 2014-01-14 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目（ 　　[通信作者] 徐丽君，E-mail：xlj0904@tjh.tjmu.edu.cn 　　随着高热卡食物摄入增多、活动减少，肥胖已经成为一种流行病。肥胖意味着体内存在过多的脂肪[1]。生理情况下，摄入的脂肪在细胞内转化成甘油三酯（TG）和胆固醇酯，然后作为能量贮存在脂肪组织的脂滴中[2]。当过多脂肪超过其贮存能力时，一部分转而贮存在非脂肪组织中[3]。体内过多的脂肪在非脂肪组织的沉积与胰岛素抵抗和β细胞功能障碍密切相关[4]。脂肪在肝脏、骨骼肌等外周组织的沉积可引起胰岛素抵抗[5]，脂肪在胰腺的沉积可引起β细胞功能缺陷和凋亡[6]。由于肥胖与2型糖尿病的发生密切相关，因此减少异位脂肪沉积有望成为防治2型糖尿病的新靶点[7]。笔者的前期研究发现，交泰丸可有效治疗大鼠2型糖尿病，其作用优于黄连和肉桂单味药，作用机制可能和减少肝脏、骨骼肌、心肌的脂肪沉积、改善胰岛素信号转导障碍有关[8-9]，其配伍比例以黄连-肉桂为2∶1时为佳[10]；临床研究发现，对于血糖控制不佳的2型糖尿病患者，加用交泰丸（黄连-肉桂配伍比例为2∶1）3个月，血糖可显著降低，磁共振波谱显示肝脏脂肪含量明显下降[11]。但交泰丸对胰腺脂肪沉积、胰岛细胞凋亡的影响未见报道，因此，笔者建立大鼠2型糖尿病模型，进一步探讨交泰丸胰腺脂肪沉积、胰岛细胞凋亡的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　选用健康清洁级雄性Wistar大鼠48只，约2月龄，体重150～180 g。所有大鼠均由湖北省疾病预防控制中心提供，标准饲料由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。 　　1.2 药物和试剂 　　交泰丸由黄连、肉桂组成，其药材均购于湖北省中药材公司（黄连产地四川，肉桂产地云南），经湖北中医药大学药学院生药教研室张秀桥教授鉴定为肉桂Cinnamomi Cortex、黄连Coptidis Rhizoma，由同济医院中西医结合研究所制备。 　　中药及复方制备：①交泰丸煎剂（黄连-肉桂2∶1），取黄连90 g，肉桂45 g，加10倍体积水煎煮2次，第1次约2 h，第2次1 h，煎煮过程用挥发油提取器提取挥发油， 浓缩水煎液，合并挥发油至450 g。②盐酸二甲双胍溶解于双蒸水中形成30 g?L-1的混悬液，置4 ℃冰箱备用。血糖试剂盒，血脂总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 试剂盒均购自上海名典生物工程有限公司、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C） 试剂盒购于北京北化康泰临床试剂有限公司、游离脂肪酸（FFA）试剂盒均购自南京建成生物工程有限公司，胰岛素放免试剂盒购自北京原子高科核技术应用股份有限公司。原位末端核苷酸标记法（TUNEL）试剂盒购于罗氏公司（Roche）。 　　1.3 动物模型的建立和分组 　　大鼠标准饲料适应性喂养1周后，随机选出8只大鼠标准饲料喂养，自由进食、进水作为正常组。剩下的40只大鼠按30 mg?kg-1剂量尾静脉注射STZ，而后普通饲料喂养2周后做OGTT实验，动物禁食12 h后，以50%葡萄糖水按2.2 g?kg-1剂量灌胃，分别于灌胃前及灌胃后1，2 h剪尾取血，采用葡萄糖氧化酶法测定各时间点血糖（FBG，PG-1 h，PG-2 h）。筛选糖耐量异常者24只作为成模大鼠（根据正常大鼠血糖值计算出95%可信度的正常范围，有2个时间点血糖值高于相应时间点血糖正常范围上限，或有1个时间点血糖值高于相应时间点血糖正常范围上限20%，被认为是糖耐量异常大鼠）。随机分为模型组、交泰丸组、二甲双胍组，加上正常组共4组，每组8只。灌胃同时给予高脂高热卡饮食（基础