干细胞标记物分析研究.pptVIP

表皮干细胞检测： (1)利用表皮干细胞最显著的两个特征，即慢周期性和自我更新能力最可靠 (2)标记分子： ①β1整合素表达水平 ②角蛋白：K15, K19 ③alpha6整连蛋白 和10G7(dim)； ④E-cadherin低表达，dotch高表达 内皮前体细胞：endothelial progenitor cells 表达 Flk-1 和 vWF 还表达内皮特异性的分子VE-cadherin 和干/祖细 胞标记 AC133 和c-kit 角膜上皮干细胞 共表达K19和波形蛋白，含丰富的α-烯醇酶、 钠-钾ATP酶和细胞色素氧化酶 但不表达K3、K4、K6、K7、K8、K13和K18 乳腺干细胞标记： Sca-1, keratin-6,11 成肌细胞标记 CD56 和 结蛋白（desmin） 肠干细胞： 正常肠隐窝基底部含有4-6个干细胞 小肠干细胞表达K8, K17, K19角蛋白 生殖干细胞GSC TNAP、SSEA-1、Oct-4 A型精原细胞包括精原干细胞，具有高水平端粒酶活性，并表达EE2蛋白，其它阶段生精细胞则不具有这样的特点。 未分化的精原细胞表达低水平的c-kit及低量的特异染色质。 干细胞标记及活体示踪 在移植前对干细胞进行合适的标记,能够对移植后的干细胞及其分化细胞与宿主自身细胞加以鉴别和示踪 光镜及电镜常用细胞标记物质 1.胞浆标记物: Hoechst(蓝色荧光) ，DiI，PKH67(绿色荧光)和PKH26(红色荧光 )等荧光色素。 2 核酸标记物：胸腺嘧啶同位素标记，5-溴脱氧尿嘧啶核苷(brom odeoxyuridine，5-BrdU), 氚胸腺嘧啶核苷(3H-Td R)标记 3.转基因：大肠杆菌乳糖操纵子中的?-半乳糖苷酶(LacZ)，绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein，GFP)，增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)和红色荧光蛋白(red fluorescentprotein，RFP)。 活体示踪干细胞常用的细胞标记物质及其在影像学的应用 1. 核医学分子显像技术活体示踪干细胞: SPECT (single photon emission computed tomography，SPECT) PET (positronem issiontom ography，PET)。 (1)代谢显像： 18F 标记的氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)， 11C-蛋氨酸和11C-乙酸盐， 18F-FDG， 18Fluorodopa(18FD)。 (2)抗体显像。放射免疫显像的核素有99mTc，111In 和131I (3)受体显像： 多巴胺、乙酰胆碱，-氨基丁酸/苯二氮,5-羟色胺和阿片受体。 转铁蛋白受体(transferrin receptor，TfR) (4)基因表达显像 报告基因表达显像：又称转基因表达显像，将能够表达可测表型(酶、受体， 转运体等) 的特定核苷酸序列(报告基因)与靶基因偶联，通过测定表型蛋白间接 反映靶基因的表达。 反义显像：是通过螯合剂将金属核素(99mTc、111In等)与反义寡核苷酸连接 (RASON)，在细胞内与靶基因的m RNA 互补结合显像，以反映目标DNA 转录情况。 2. 磁共振成像(M RI)活体示踪干细胞 能够用于干细胞标记研究的M R 造影增强剂主要有两类： (1)? 钆(gadolinium )类： (2)氧化铁(iron oxides)类：主要是磁性纳米材料超顺磁性氧化铁(superparam agneticiron oxide，SPIO)和超小顺磁性氧化铁(ultrasm allparam agnetic iron oxide particles，USPIO) 细胞的标志物的研究方法实例 CD34 1984年，Cividin等用人髓系白血病细胞kG1a 制备了单抗My10，能与大多数骨髓来源的造血干祖细胞膜上分子量为105-120KD膜蛋白特异结合 Tindle等又制备出另一株CD34单抗BI.3c5，并证实了Cividin的发现 1986年第三界国际人类白血病细胞分化抗原协会将其命名为CD34 CD34单克隆抗体检测的抗原即为CD34分子 CD34抗原被认为是造血干细胞 (HSCs) 的标志物 Osawa等人首先证明小鼠HSCs可以是CD34阴性 1 羊胎干细胞移殖模型 人CD34+Lin-细胞(3.5×106) 受孕55-60天的羊