蛋白纯化层析柱--GE 详细介绍1.docVIP

蛋白纯化层析柱2011-06-15 15:19:14 HYPERLINK 易生物仪器 浏览次数：1164 HYPERLINK /comment/?keyid=phpcms-content-title-50962verify=3df456a19b36cb19b336a3394f5159d1网友评论 0 条　　从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的液相色谱仪。这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。其中最值得提到的就是...关键词：HYPERLINK /tag.php?tag=????蛋白HYPERLINK /tag.php?tag=????离子HYPERLINK /tag.php?tag=????交换HYPERLINK /tag.php?tag=????分离HYPERLINK /tag.php?tag=????分子HYPERLINK /tag.php?tag=????物质HYPERLINK /tag.php?tag=???树脂　　从个人学术性实验室到大型的医药制造企业，小型或者大规模的蛋白纯化通常都需要几种类型的HYPERLINK /yp/product-list-93.html液相色谱仪。这些相关的大部分技术已应用了多年，但是新型柱料的发展为这些利用蛋白物理和化学特性进行分离的，经过时间考验的方法注入了新的力量。其中最值得提到的就是凝胶过滤层析技术（gel filtration，GF），离子交换层析技术（ion exchange，IEX），羟基磷灰石层析（hydroxyapatite，HAP）和疏水作用层析（hydrophobic interaction，HI)，以及亲和层析和高效HYPERLINK /yp/product-list-93.html液相色谱方法（high-performance liquid chromatography，HPLC）。　　对于一个初接触蛋白纯化的新手而言，从哪儿下手也许是令人头疼的一件事，但是幸运的是目前这些流程都已经逐步系统化了。GE Healthcare（原Amersham Biosciences）的技术顾问Andrew Mitchell解释道，通常利用HYPERLINK /yp/product-list-93.html液相色谱技术进行蛋白纯化有三步：　　捕获——从细胞其它成份，比如DNA和RNA中分离需要的蛋白；　　区分——从与目的蛋白具有相近的大小，或者相似的物理/化学特征的污染物中分离蛋白；　　修饰——使分离得到的样品处于可使用状态。　　这每一个纯化的步骤都有特定的色谱层析技术和最佳的beads大小。　　第一步捕获步骤，也就是从细胞裂解物粗成份中分离蛋白，这需要一个具有高容量和高流量（flow rate）的HYPERLINK /yp/product-list-1007.html填料。bead大小比较大，范围比较宽（比较于bead大小平均值）的“fast flow”HYPERLINK /yp/product-list-1007.html填料比较理想，这种HYPERLINK /yp/product-list-1007.html填料也有利于防止目标蛋白被水解——因为速度比较快。　　第二步则对分辨率要求更高，需要更好的从混合物中分离需要的成份。通常bead的大小与分辨率成反比，因此在这一部中比较小的bead比较合适。吸附性的技术，比如离子交换IEX和疏水作用HI通常被用在纯化的这前两个步骤，而凝胶过滤则会留到了最后的修饰那一步，用于小体积，高浓度的样品。另外要注意，进行凝胶过滤层析时，样品的体积应该保持在柱床体积的1%到4%。　　选择柱料的时候有两个因素要考虑到，针对目的蛋白的选择性和有效性——这些可以由洗脱峰的宽度来说明。其中选择性主要是指填料与目的蛋白相互作用以及结合的能力，IEX和HI层析方法就是指目标分子与筛分介质之间的相互作用，而GF的选择性依赖于填料的分馏范围（fractionation range）。　　柱料的有效性则是指层析介质洗脱样品得到显著层析峰的能力，Mitchell表示，“如果你的峰值不集中，比较宽，那么即使是选择性很好，分辨率仍然会被消弱”。bead越大，洗脱峰就越不集中，柱子的有效性就越低。纯化洗脱相近的蛋白需要高效性，高选择性和高效性的结合就会得到高分辨率。　　凝胶过滤层析(gel filtration chromatography)　　凝胶过滤法（gel filtration）也称为排阻层析（exclusion chromatography）、凝胶层析（gel chromatography）或分子筛层析（molecular siev