单克隆抗体在百草枯中毒模型中作用.docVIP

单克隆抗体在百草枯中毒模型中作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.10.009 　　基金项目：江苏高校优势学科建设工程资助项目（J 　　通信作者：张劲松，Email：zhangjso@ 　　【摘要】目的 探讨白细胞介素17单克隆抗体 （IL-17 monoclonal antibody，IL-17 MAb） 在百草枯致小鼠肺纤维化模型中的作用。方法 将雄性C57BL/6小鼠60只，随机（随机数字法）分为三组：对照组 （n=12） 腹腔注射生理盐水0.1 mL，染毒组 （n=24） 腹腔注射百草枯 （25 mg/kg） 溶液0.1 mL和治疗组 （n=24） 腹腔注射百草枯 （25 mg/kg）同时予尾静脉注射IL-17MAb （5 μg/mice）；在注射处理后第1、7、14天采血，并用酶联免疫吸附法检测各组小鼠的白介素-17A （IL-17A）、转化生长因子-β1 （TGF-β1）、干扰素-γ （IFN-γ） 的表达水平；肺组织切片进行HE染色，并观察其病理变化；记录各组病死数量，并计算生存率。运用SPSS 21.0软件进行统计分析，其中各细胞因子分泌水平的动态变化以及在各实验组间的差异都采用单因素方差分析 （One-Way-ANOVA），各实验组的生存率差异采用费希尔精确检验 （Fisher s exact test）。结果 百草枯注射处理后，细胞因子IL-17A和TGF-β1的分泌水平都升高 （P 　　【Key words】Monoclonal antibody；IL-17 monoclonal antibody；Paraquat；Pulmonary fibrosis；Th17；Cytokine；Interleukin-17 A；TGF-β1；IFN-γ 　　百草枯是目前世界范围内广泛应用的除草剂，对人畜均有较强的毒性。百草枯中毒在临床医学中病死率极高，目前尚无特效的救治方法。严重的肺纤维化导致的呼吸衰竭是百草枯中毒的重要死因，因此如何减缓肺纤维化进程，降低病死率，成为百草枯中毒治疗的关键[1]。近年发现的一个新的CD4+效应T细胞亚群Th17细胞，具有极强的致病潜能，可通过表达相应的细胞因子如IL-17A （interleukin-17），刺激成纤维细胞分泌炎症因子，激活NF-κb转录活性，因而IL-17A被认为是肺组织损伤纤维化形成的一个重要环节[2-4]。Hassuneh等[5]研究表明，百草枯诱导的肺纤维化模型中IL-17家族细胞因子显著上调；米粟等[6]研究表明IL-17MAb能阻止博来霉素致急性肺损伤向肺组织纤维化进展；Chen等[7]的研究亦表明，IL-17MAb能延缓二氧化硅诱导小鼠肺损伤向纤维化的进程。由??可见，IL-17MAb可能成为治疗肺纤维化的新方法。而IL-17MAb在百草枯致小鼠肺纤维化模型中的作用，尚不明确。利用百草枯致肺纤维化小鼠模型，本实验研究在IL-17MAb干预下模型鼠IL-17A、TGF-β1、IFN-γ细胞因子的表达水平、肺病理改变以及小鼠生存率的变化，为探讨IL-17MAb在肺纤维化进程中的作用和促进其治疗提供基础理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　SPF级C57BL/6雄性小鼠60只，6～8周，体质量18～20 g，由扬州大学比较医学中心提供；随机（随机数字法）分为3组，对照组（Saline组）12只，染毒组（PQ组）及治疗组（IL-17MAb组）各24只；恒温恒湿，自由饮食。 　　1.2 主要试剂及药品 　　百草枯购自江苏苏中农药化工厂，原瓶质量分数20%；小鼠IL-17MAb购自RD Systems USA；IL-17A、TGF-β1、IFN-γ细胞因子ELISA试剂盒均购自 RD Systems USA。 　　1.3 实验模型的制备 　　对照组（Saline组）腹腔注射生理盐水0.1 mL；染毒组（PQ组）腹腔注射百草枯溶液（25 mg/kg）；治疗组（IL-17MAb组）腹腔注射百草枯染毒（25 mg/kg），同时予尾静脉单次注射IL-17MAb（5 μg/只）。 　　1.4 观察指标 　　各组实验动物于第1、7、14天采血离心，取血清于-70 ℃冻存待细胞因子检测。血清IL-17A、TGF-β1、IFN-γ质量浓度采用酶联免疫吸附法，按说明书规程操作。第14天随机选取3组实验动物成活小鼠各3只，取右肺组织以10%甲醛浸泡固定，石蜡包埋，4 μm组织切片，苏木精-伊红 （H-E）染色，作病理学观察比较。 　　1.5 统计学方法 　　采用SPSS 21.0软件进行分析，数据以均数±标准差（x±s） 表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-W