第十八篇 平面色谱法.pptVIP

第十八章 平面色谱法 平面色谱法（plane chromatography）是在平面上进行分离的色谱方法 主要包括：薄层色谱法 纸色谱法 第一节 平面色谱法的分类和原理 1. 薄层色谱法 固定相铺在玻璃板、铝箔、塑料板上形成薄层 2. 纸色谱法 固定相：纸纤维上吸附的水分（分配色谱） 流动相：不与水相混溶的有机溶剂 3. 薄层电泳法 带电荷的被分离物质在薄层惰性支持介质上，向与其相反的电极方向以不同速度泳动而实现分离 二、平面色谱法参数 1. 比移值 例 化合物A在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿距原点16.2cm。 （1）计算化合物A的Rf值 （2）色谱条件相同时，当溶剂前沿移至距原点14.3cm时，化合物A的斑点应在何处？ （二）相平衡参数 （三）面效参数 1. 理论塔板数 L ：原点到斑点的距离 W：组分斑点的纵向宽度 2. 塔板高度 L0 ：原点到展开剂前沿的距离 （四）分离参数 1. 分离度 第二节 薄层色谱法（TLC） （一）吸附薄层色谱法 固定相：吸附剂 （二）分配薄层色谱法 固定相：吸留在载体上的液体（如，硅胶上的水） 流动相极性固定相极性 正相色谱 流动相极性固定相极性 反相色谱 二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 1. 硅胶 为多孔性无定形粉末，表面有硅醇基呈弱酸性，通过硅醇基与极性基团形成氢键而表现其吸附性能。 失活：硅胶吸水后形成水合硅醇基而失去吸附能力 活化：加热至100?C以上 pH～5，适合中性、酸性物质的分离 种类：硅胶H、硅胶G、硅胶GF254等 2. 氧化铝 种类：中性、碱性、酸性 （二）展开剂 展开剂的选择主要根据被分离物质的极性、展开剂的极性来决定 常用溶剂极性强弱： 水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯三氯乙烷四氯乙烷环己烷石油醚 例：P390/15 答：极性小的组分Rf值大 六种染料的极性顺序为： 偶氮苯对甲氧基偶氮苯苏丹黄苏丹红对氨基偶氮苯对羟基偶氮苯 根据取代基的极性大小排出顺序 苏丹黄、苏丹红是带有羟基的偶氮苯，但其构型易形成分子内氢键而使极性降低 苏丹红因共轭体系比苏丹黄更长，极性更强。 三、薄层色谱操作方法 薄板：加粘合剂的硬板、不加粘合剂的软板 粘合剂： 羧甲基纤维素钠 CMCNa 硅胶CMC板 煅石膏 CaSO4·1/2H2O 硅胶G板 在日光下观察 在紫外灯下观察 荧光薄层板检测 显色剂显色 四、定性和定量分析 用Rf值定性 五、高效薄层色谱法HPTLC 高效薄层板用喷雾法制成 吸附剂颗粒比经典薄层色谱法小得多 有效塔板数可达5000以上 六、薄层扫描法 用一定波长和强度的光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。 透射法测定 反射法测定 扫描方法：光源不动，薄层板动 定量分析：外标法 七、薄层色谱的应用及实例 判断合成反应的程度 药品的鉴别和纯度的检查 天然药物的鉴别和定量测定 第三节 纸色谱法 纸色谱过程是溶质在固定相和流动相之间连续萃取的过程 属于正相分配色谱 化合物极性大或亲水性强，则分配系数大，Rf值小 二、纸色谱法的实验条件 1. 色谱纸的选择 2. 固定相 滤纸纤维通常含20％～25％的水分，其中有6％～7％的水分以氢键缔合的形式与纤维素的羟基结合在一起 3. 展开剂的选择 物质在两相中的溶解度 展开剂的极性 水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等作展开剂，并加入少量酸或碱，如 正丁醇－醋酸－水 * * Plane Chromatography 一、平面色谱法的分类 0 ? Rf ?1 Rf 0.2～0.8为宜 （一）定性参数 2. 相对比移值 解 2. 分离数 在相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0和Rf=1两组分斑点间能容纳的色谱斑点数 证明： 一、薄层色谱法的主要类型 （一）吸附剂 （一）薄层板的制备 有机溶剂，浓度约为0.01％～0.1％ 原点直径：2～4mm 工具：点样毛细管、微量注射器 （二）点样 （三）展开和展开剂的流速 1. 展开剂的流速 2. 展开 展开器皿常为长方形密闭玻璃缸，上行法展开 （四）显色 （二）定量分析 1. 洗脱法 用溶剂将斑点中的组分洗脱下来，再定量测定 2. 直接定量法 目视法 薄层扫描法 （一）定性分析 一、纸色谱法的分离原理 *