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PRDX5基因启动子荧光素酶报告质粒构建 　　摘要：目的 构建含PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒。方法 ①通过生物信息学方法，查询PRDX5基因启动子核酸序列；②使用PCR扩增人PRDX5基因启动子片段，将启动子插入到pGL3-Basic载体中，构建含PRDX5基因启动子片段的荧光素酶报告质粒；③双酶切及测序确定PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒扩增正确。结果 PCR扩增的PRDX5启动子片段插入到载体中，经测序证实正确。结论 成功构建含PRDX5启动子的荧光素酶报告质粒。 　　关键词：PRDX5；启动子；荧光素酶报告基因 　　Construction of Luciferase Reporter Plasmid PRDX5 Gene Promoter 　　HU Le-lin 　　(School of Medicine,The Anhui University of Science and Technology,Huainan 232001,Anhui,China) 　　Abstract：ObjectiveTo construct a pGL3-PRDX5-promoter-Luc plasmid and to vertifying its luciferase activity. Methods①search the nucleic acid sequence of the promoter PRDX5 by bioinformatics analysis.②Methods of PCR was performed to amplify the promoter PRDX5. the promoter PRDX5 was inserted into pGL3-Basic cloning vector to construct luciferase reporter plasmid with the promoter PRDX5.③pGL3-PRDX5-promoter-Luc plasmid was verified by double-enzyme cleavage and sequencing method.ResultspGL3-PRDX5-promoter-Luc plasmid was identified to be correct by double-enzyme cleavage and sequencing method.Conclusion A pGL3-PRDX5-promoter-Luc plasmid was successfully constructed. 　　Key words：PRDX5;Promoter;Luciferase reporter plasmid;Reactive oxygen species 　　PRDX5是Peroxiredoxins（PRDXs）过氧化物酶家族蛋白的一种，研究显示在它广泛表达于哺乳动物的各种细胞，定位于细胞质、过氧化物酶体和线粒体中，但在许多细胞中PRDX5主要定位于线粒体，它与组织过氧化物、过氧化亚硝基阴离子有高的亲和力[1]。Masaki shiota[2]等人发现在外源过氧化氢处理或组织缺氧情况下人类前列腺癌PC3细胞PRDX5表达增高。研究还显示人类定位于线粒体的PRDX5能保护线粒体DNA免受过氧化氢的损伤。并且PRDX5能够抑制p53诱导的活性氧簇的产生和细胞凋亡[3]。 　　1材料与方法 　　1.1实验材料 　　1.1.1 菌种、质粒和细胞系大肠杆菌tans-5α购自Trans-Gene（全式金）公司；载体质粒pGL3-Basic，由本室保存。 　　1.1.2 DNA 重组所用工具酶及试剂BglII、MluI 等限制性内切酶，Taq DNA Polymerase，T4 DNA Ligase购自New England Lab和Promega 公司。大提质粒试剂盒购自威格拉斯仪器有限公司。其它常规试剂均为进口分装或国产分析纯。 　　1.2方法 　　1.2.1用PCR和酶切的方法得到目的片段利用DNA提取试剂盒在U2OS细胞中提取全基因组细胞作为模板，根据已知PRDX5cDNA序列，由生物信息学方法自UCSC数据库分析其可能的转录起始位点，选择TSS上游约1200bp下游约200bp范围作为其可能的启动子序列进行引物设计。预计扩增片段长度为1400bp。我们使用软件DNAMAN分析其上可能存在的限制性内切酶位点，结合载体质粒pGL3-Basic上的限制性内切酶位点，选择分别在上、下游引物末端，添加BglII、MluI限制性内切酶位点序列。见表1。 　　 　　 　　 　　 　　1.2.2目的片段与相应