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冰石愈伤软膏无菌检查方法验证 药物鉴定 冰石愈伤软膏无菌检查方法验证2011年第20卷第8期 李秋菲-,刘瑜,施瑞洁 (1.陕西省食品药品检验所,陕西西安710061; 2.西安日化医院,陕西西安710050;3.陕西省人民医院,陕西西安710060) 摘要:目的建立冰石愈伤软膏的无菌检查方法并对方法进行验证.方法按2005年版《中国药典(一部)》软膏剂项下要求进行试验,采用 薄膜过滤法,冲洗量为300mL.结果样品管无菌生长,6株阳性对照菌生长良好.结论采用薄膜过滤法验证试验进行冰石愈伤软膏的无 菌检查,方法有效,可行. 关键词:冰石愈伤软膏;无菌检查方法;薄膜过滤法;方法验证 中图分类号:R286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)08—0040—02 冰石愈伤软膏为外用制剂方中含大黄,人工牛黄,人工麝香 等,对金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,白色念珠菌有抑制作用,且本 身又含有基质,必须以适当方法对供试品进行前处理,消除其抑菌 作用,才能进行无菌检查.2005年版《中国药典(一部)》规定,用于 烧伤或严重创伤的软膏剂按无菌检查法检查…,不得有菌生长.通 过研究,笔者采用薄膜过滤法用4株细菌,2株真菌进行了无菌检 查方法验证试验,以确认该法是否适用于冰石愈伤软膏的无菌检 查,现报道如下. 1仪器,试药与菌种 HTY一2000型智能集菌仪;KSF一次性全封闭集菌器(杭州泰 林生物技术设备有限公司).冰石愈伤软膏(西安强生药业有限公 司,规格为18g/支,批号.金黄色葡萄球菌fCMCC (B)26003】,铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104】,枯草芽孢杆菌 [CMCC(B163501】,生孢梭菌【CMCC(B)64941】,白色念珠菌 [CMCC(F)98001】,黑曲霉【CMCC(F)98003】均来自于中国药品 生物制品检验所,前5株菌传代数为第3代,黑曲霉为第2代.硫 乙醇酸盐培养基(批号为070321),改良马丁培养基(批号为 0810203),营养琼脂培养基(批号为080922J,玫瑰红钠琼脂培养 基(批号为0810233),营养肉汤培养基(批号为07105l8),改良马 丁琼脂培养基(批号为080621),pH=7.0的氯化钠一蛋白胨培养 基(冲洗剂,批号为071026)均为北京三药科技开发公司产品,配制 方法均按瓶签说明配制.0.9%灭菌氯化钠溶液(NS,沈阳化学试剂 厂生产,试验室配制). 2方法与结果 21菌液制备” 取枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌的新鲜培养 物,分别接种至营养肉汤培养基l0mL中,置30～35培养24h, 用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～～l0,使菌落数为5O～ 100CFU/mL.接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养 基中,于3O～35培养16～18h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至 50～100CFU/mL,在硫乙醇酸盐培养基中计数;取白色念珠菌的 新鲜培养物至改良马丁培养基中,于20～25cC培养24h,用0.9% 无菌氯化钠溶液稀释至50～100CFU/mL;取黑曲霉的新鲜培养物, 接种至改良马丁琼脂斜面培养基上,于25培养7d,加0.9%无菌 氯化钠溶液3mL洗脱孢子,用0.9%无菌氯 化钠溶液制成含孢子数50～1O0CFU/mL的 混悬液备用.详见表1. 22培养基灵敏度和无菌生检查 取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流 体培养基9支,分别接种小于1O0CFU的金 黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,枯草芽孢杆 ? 40? 表l验证用菌液的稀释度及接种量 菌,生孢梭菌各2支,另1支不接种作为空白对照,培养3d;取每 管装量为9mL的改良马丁培养基5支,分别接种小于100CFU的 白色念珠菌,黑曲霉各2支,另1支不接种作为空白对照,培养5d. 另随机各取5支培养基,培养14d,逐日观察结果.以加菌的培养 基管均生长良好,空白对照管无菌生长作为标准,判断该培养基的 灵敏度检查符合要求.以培养14d后均无菌生长作为标准,判断该 培养基无菌性检查符合要求. 23供试液制备 取规定量供试品5g,加至含20mL无菌十四烷酸异丙酯和无 菌玻璃珠的容器中,置45.C水浴中约5min,充分振摇,使其溶解.然 后加人预热至45的pH=7.0的氯化钠一蛋白胨缓冲液200mL, 振摇8min萃取,静置,取其下层水相作为供试液. 24薄膜过滤法方法验证 取KSF一次性全封闭集菌器(两联)1套,在一管中先泵人培 养基并夹紧管口,取其下层水相供试液,置pH=7.0的氯化钠一蛋 白胨溶液100mL中,按薄膜过滤法滤至另一管,经冲洗(300mL/ 膜)并泵入相同培养基,于两管中分别接种人小于1O0CFU的试验 菌,前者作为阳性对照管,后者作为试验管.再取硫