第七篇 转座因子2.pptVIP

第七章 转座子;第一节 概述 第二节 转座子的分类 第三节 转座发生的机制 第四节 反转录病毒和反转座子;1 概念： 转座子（transponsn,简称Tn）, 又称易位子，是指存在于染色体DNA上可以自主复制和位移的一段DNA顺序。 转座子可以在不同复制子之间转移，以非正常重组方式从一个位点插入到另外一个位点，对新位点基因的结构与表达产生多种遗传效应。 ;2 转座因子的发现和检出;Barbara McClintock;Prokaryotic transposons： -------插入序列（insertion sequence， IS) -------复合转座子（composite transposon) -------可转移噬菌体(transposable phages) Eukaryotic transposons： -----转座子（transposon) -----反转座子（retrotransposon) ;第二节 转座子的分类;DNA转座的一般模式;;转座过程： n?转座酶（transposase）催化IS的转座，它由IS编码。 n?首先转座酶交错切开宿主靶位点，然后IS插入，与宿主的单链末端相连接，余下的缺口由DNA聚合酶和连接酶加以填补，最终插入的IS两端形成了DR或靶重复。 ? ;若IS插入到某基因内，通常这个基因就会失活，发生基因突变。 不同IS的插入方向不同，基因突变的结果不同: 如IS1因子不论以什么方向插入都会降低基因的表达， 而IS2因子以同一方向插入到染色体中，则会减少基因的表达，但以相反方向整合，则会增加基因表达。 不同转座元件的转座频率不同。一般为10-3-10-4 次/世代。 恢复频率则很低(通过精确切除IS元件而产生)，为10-6-10-10/代。比插入频率率低 10 -3 倍。 ;2 复合转座子（composite transposon） 复合转座子是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。 存在于R因子及其它质粒中。 复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。 ;表 复合转座子的结构和功能;;第三节 转座发生的机制;1 类型;;2 转座的机制2.1 复制性转座:特征：1）转座后原来位置上的转座因子保持不变；2）在新的位置上的转座因子的两侧出现顺向重复序列3）转座过程中有一共合体(cointegrate)。;;共合体(cointegrate)的发生 ?Mu噬菌体DNA的起始操作是由MuA转座酶完成的。 带有22bp一致序列的3个MuA结合位点位于DNA的二端。L1，L2和L3在左端；R1，R2和R3在右端。 ??表示Mu转座子DNA和靶序列通过3个阶段阶段反应进行连接。;Mu噬菌体的转座酶(MuA)使Mu的末端联会并反式剪切其末端DNA，然后和靶位点DNA反式连接 ;2.2 非复制型转座 断裂和重接反应使靶重构。 供体保持裂缺。 不形成共合体。 ;3 转座作用的遗传效应;;4 TnA转座模式;5 Tn10的转座 每个转座子控制自身转座的核心----控制转座酶的水平 不到一个转座酶分子／世代／细胞 ?自发转座频率---10－7 Tn10有两种控制转座的方式 ; a） 通过反义RNA的翻译水平控制; b） 甲基化作用控制转座酶合成及其与DNA的结合;主要类型转座子 类型 结构特征 转座机理 举例;第四节 转座噬菌体 Mu phage （巨型转座子 ） ;Mu噬菌体为一37kb的线状DNA，两端各带一小段大肠杆菌的DNA，这与该噬菌体插人大肠杆菌染色体上有关。 距末端不远处也有类似于IS的序列，但位置不对称。靠近一端处存在与转座有关的A、B基因，它们分别编码70000和33000两种蛋白，在A、B与末端之间有一C区，对A、B有负调控作用。 ;; Mu的插入途径;Mu的转座频率比一般的转座子要高，它的两端携带宿主的DNA，而且每一个Mu所携　带的宿主DNA都各不相同。在转座过程中，它摆脱两端原有的细菌DNA而转座到新的某个位点上。;homework;1.描述两种转座子引起基因组重排的方式。 2.IS元件整合到靶位点时会发生什么? 3.一个复合转座子和一个IS元件之间的关系是什么?。 4.列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤. 。;;Answer;3.复合转座子在两个末端有IS序列 4.首先，在靶位点处产生一个交错切口，切出转座子。接着，转座子与靶位点连接。最后，填补插入位点两侧的单链区。 5.转座子转座时能够导致宿主序列的缺失、重复或插入。另外，转座子通过宿主重组系统导致基因组重排。;6.复合转座子在两个末端有IS序列 7.插入