(食品微生物检验技术）大肠菌群检测（平板计数法）.ppt

* * 大肠菌群检验平板计数法 平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。 适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。 所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。 适用范围与培养基 检样25g(ml)+225ml稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板 计数典型和可疑菌落 36℃±1℃ 18~24h BGLB肉汤证实试验 36℃±1℃ 18~24h 报告结果 注：VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)又称为：VRB或VRBL 平板计数法流程图 GB 4789.3-2016（第二法） 平板计数法操作 菌落数在15-150之间的平板,计数典型和可疑菌落 36℃±1 ℃ 18h ~24h 挑选10个菌落分别接种到BGLB 典型菌落为紫红色周围有红色胆盐沉淀环，0.5mm 配方(g/L): 蛋白胨:7.0; 酵母粉:3.0;乳糖:10.0;3号胆盐:1.5;中性红:0.03;结晶紫:0.002;氯化钠:5.0; 琼脂:15.0;pH 7.4±0.1,25℃ 其中蛋白胨提供氮源；酵母粉提供生长促进因子和Ｂ族维生素；乳糖提供碳源，大肠菌群发酵乳糖，产生酸性物质；３号胆盐是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌；结晶紫也是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌和一部分革兰氏阴性菌；中性红是一种指示剂，在酸性条件显红色，碱性条件下显无色。氯化钠维持细菌生长时的渗透压。琼脂是一种凝固剂。 VRBA琼脂 选择菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。 平板菌落数的选择 一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型菌落不符合的菌落。 另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本来大肠菌群的定义是发酵乳糖，但由于样品含有的其他糖类混入了培养基，使得不能分解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长出红色菌落，所以需要进行证实实验。 什么样的菌落必须要做证实试验 * *