201404DNA粗提取与鉴定选修一.ppt

DNA的鉴定 讨论2：如何证明他们是遗传物质？ 讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？ 讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？ DNA的粗提取与鉴定 实验原理 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应 DNA粗提取 选择适宜材料 破碎细胞 DNA的溶解和析出 DNA的纯化 鉴定DNA 二苯胺，沸水浴，蓝色 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 提取DNA的方法 1、DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 2、DNA在酒精溶液中的溶解性 DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响 4 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 快速 沿一个方向 1.什么是鸡血细胞液？ 2.能否换成哺乳动物成熟的红细胞？为什么？ 2.不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不含有DNA 2、植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 ②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论：此时食盐（NaCl）的浓度是多少？为什么？ 2mol/L 在此浓度下DNA的溶解度较大 （三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 答：可能含有蛋白质、多糖、脂质和RNA等杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 （四） DNA的析出与鉴定 预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂； 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 2mol/L 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 5、过滤含DNA的粘稠物 纱布过滤 6、再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液 取滤物 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。 1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．DNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 A. DNA溶解于水 B． 血细胞破裂，DNA释放 C．稀释血液，防止凝固 D． 有利于搅拌 3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分离DNA和蛋白质 C. 溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质 4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是 A．有利于溶解DNA 　 B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度