10-ELISA结果影响因素[1].pptVIP

结果影响因素——操作因素 正常情况下的双抗体夹心法ELISA反应 一步法抗原过量时出现钩状效应 特点：不易发现 对结果的影响： 强阳性 → 假阴性 解决方法：标本稀释 结果影响因素——操作因素 [2]王珂等.ELISA法测梅毒螺旋体抗体钩状效应2例分析.中国误诊学杂志.2008Vol8No.33. 表2 不同血清稀释度下的S/OD值（OD值为0.105） 项目 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 标本1 0.92 3.77 8.11 12.25 15.24 17.88 16.34 10.88 7.58 标本2 0.63 2.59 4.83 5.82 10.03 7.49 5.78 3.95 2.60 温育（成败关键） 每种试剂都有其最佳反应模式，其中温度和温育时间是重要因素。 结果影响因素——操作因素 [3].刘运保.操作因素对ELISA检测结果的影响.公共卫生与预防医学.2005.Vol.16.No.4 表3 不同孵育条件对结果的影响 [4]许萍等.不同温育环境ELISA检测抗—HCV的比较.临床检验杂志.2002.Vol.20.Mo.3 A.1、2、3全部在雅培鼓风式恒温系统温育 B.1、2、3全部在水浴恒温箱温育 C.1、2干式3水浴 D.1、2水浴3干式 E.1水浴2、3干式 F.1干式2、3水浴 G.1水浴2干式3水浴 H. 1干式2水浴3干式 1.反应板中加待检样品37℃60min2.加酶标记物37℃60min3.加底物溶液37℃30min 表4 不同温育条件下的检测结果 结果影响因素——操作因素 边缘效应 使用96孔板的ELISA测定中，常发生“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温置于37℃温箱(非水浴)，板孔升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。 所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。?另外，酶标板也是一个比较重要的因素，选择质量好一点的板能一定程度减少板内误差。 结果影响因素——操作因素 5 [1].许斌等.ELISA检测HBsAg影响因素的探讨. 临床检验杂志.2000.VoI.18.No.4 结果影响因素——操作因素 洗板 在ELISA中正确的洗涤是保证得到可重复结果的关健一步，应引起操作者重视。ELISA就是靠洗涤来达到分离游离和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。 结果影响因素——操作因素 显色 有研究报道按A、B液的顺序分别滴加和将A、B液混合后滴加，检测结果有显著差异, 中值阳性和高值阳性分别平均下降了33.6%和30.0%[2]。 OPD（邻苯二胺）底物显色一般在室温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间，可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色，显色反应应避光进行。 TMB（四甲基联苯胺）受光照的影响不大，可在室温中置于操作台上，边反应观察结果。TMB经HRP作用后，约40分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全消退至无色。 [2].刘运保.操作因素对ELISA检测结果的影响.公共卫生与预防医学.2005.Vol.16.No.4 结果影响因素——操作因素 比色 作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能稳定与否，决定结果的可靠度。 定期进行保养，对滤光片要定期校正。 设置要正确，最好使用双波长。 读数时最好先擦试微孔板底部并压平板条。 酶标仪不要安置在阳光或强光照射下， 使用前先预热仪器15-30分钟，测读结果更稳定。 结果影响因素——操作因素 [4]谭凌卉.ELISA法检测HBV血清标志物影响因素的分析.湖南师范大学学报（医学版）2009.6（2）. 图1 终止反应后酶标仪不同时间扫描结果 加终止液后尽快比色。  实验室环境也是保证结果可靠的因素之一， 应做好以下控制： 通风、采光与防尘； 控制温度及湿度，环境温度与湿度随地理位置不同可有很大差异应使用系统空调进行控温，并要求控制空气湿度为 40%-70%之间； 消除噪音与电磁干扰； 稳定水电，实验过程中应采用蒸馏水 （ 纯水）或经软化处理的自来水。 结果影响因素——环境因素 综上所述，ELISA检测结果是受多方面因素影响的，