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疟原虫检验技术 血涂片检查疟原虫是诊断和鉴定疟原虫种别的主要方法，也是疟疾流行病学调查的重要部分，血涂片制作和染色的好坏足以影响检查的结果，必须把握好“三关”。 玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。在用手指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表面，以避免手指上的油污染玻片。 新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后用软而洁净的毛巾擦干待用。 ①5%的肥皂水煮沸法： 将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂水，煮沸后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然后灭火待肥皂水稍冷后，将洁干毛巾擦净后待用。 ②清洁液浸泡法： 清洁液配制如下： 重铬酸钾 80g 浓硫酸 100ml 水(清净水)1000ml 二、制片 1.薄血膜涂制 2.厚血膜涂制 薄血膜 厚血膜 标记处 1.薄血膜涂制： 1.薄血膜涂制 (1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针迅速刺入耳垂近下端边缘处。 (2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向将耳垂轻轻挤压出血。 (3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂上的血滴（不要将玻片接触耳垂上的皮肤），使一小滴血在玻片上。血量1-1.5mm3 .1/4火柴头大小。 薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了疟原虫。 厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。 血片制作和染色质量规范 血片制作和染色质量判定标准 1.血片制作质量判定标准： 好：厚薄血膜均好，或薄血膜好，厚血膜中。 中：薄血膜中，厚血膜好或中。 差：薄血膜差，或厚薄血膜均差。 2.血片制作和染色合格率要求：分别以血片制作、染色和清洁度的好、中、差合并计算合格率。 (1)血片制作合格率应在85%以上。 (2)染色合格率应在85%以上。 (3)清洁度合格率应在80%以上。 三、染色 常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种 (一)吉氏染色法： 吉氏染剂是最可靠的血膜染剂，其优点是易于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢.  为了保证染色良好，使疟原虫的红核和兰胞浆分明，感染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂原液时，所用的蒸馏水必须加缓冲液（缓冲蒸馏水）。新鲜蒸馏水可能接近中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空气中的二氧化碳而变为酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲液，使其达到我们需要的酸碱度。 稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜，现用现配，可按下表配制：缓冲蒸馏水的配制（ml） ph 磷酸二氢钠液　磷酸二氢钾液　蒸馏水 6.6　　37　　　　　　63　　　　　　　900 6.8　　49　　　　　　51　　　　　　　900 7.0　　63　　　　　　37　　　　　　　900 7.2　　73　　　　　　27　　　　　　　900 7.4　　81　　　　　　19　　　　　　　900 在无条件的地方，此时也可用当地的饮用水煮沸过滤后试染，试染结果如淋巴细胞的胞浆呈兰色红血球染色不很兰就可使用。 3.染色步骤： ①固定：用吉氏染液染色须先将薄血膜用甲醇或无水酒精固定。滴于薄血膜上，也可用玻棒沾取甲醇涂在薄血膜上，避免甲醇流至厚血膜，误将其固定，可用蜡笔划一条线，或者是斜放玻片，玻片上的甲醇蒸发干后即可染色。 ②溶解血红蛋白，在厚血膜上加2-3滴蒸馏水，待血红蛋白充分溶解后倾去玻片上的水，待血膜干后即可染色。 ③染色： 快染：5：1(20%)，5滴水，1滴染液(原液)，染5分钟清水冲洗即成。 慢染：20：1(5%)，20滴水，1滴染液(原液)，染30分钟用清水冲洗。 待片水干后镜检。 (二)瑞氏染色法： 瑞氏染剂粉 0.2g 甘油(中性) 3ml (无中性的也可) 甲醇(中性) 97 ml 将瑞氏染粉放入乳钵中，加入甘油充分研磨，然后加入甲醇10 ml，混合后倒入干燥、清洁的棕色玻璃瓶内，分次将甲醇倒入乳钵内，至乳钵内染剂洗净为止，配制好的染液充分摇匀即可使用。 （1）先用蜡笔在厚薄血膜间划一界限，然后用缓冲蒸留水滴2-3滴在已干的厚血膜上，溶血后倾去水滴。（2）加瑞氏染液5-8滴于薄血膜上，染色1-2分钟。（3）加5-8滴缓冲蒸留水于薄血膜上，用吸管混合均匀后把染液引到厚血膜上，使厚薄血膜同时染色约10分钟。（4）用清水轻轻冲去染