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PAGE PAGE 33诊断病理病理诊断：泛指应用病理学理论和技术，对取自机体内生前或死后的病变组织、细胞进行形态学观察、分析作出的疾病诊断。诊断病理学（外科病理学）：指临床上由于诊断和治疗的需要，对取自病人活体内的病变组织、细胞，进行病理诊断的一门医疗实践科学——病理学的一个分支。诊断病理学的任务：⑴确定疾病的诊断；⑵为临床选择治疗方案提供依据；⑶提供疾病的严重程度和预后的信息；⑷帮助临床判定病情取向及疗效；⑸为科学研究积累宝贵的资料、发现新病种等；⑹诊断病理学的检查方法及评价。活体组织检查　⑴术前活检：创伤小，绝大多数能帮助临床确诊　⑵术中活检：确定病变性质、了解病变、确定所取标本是否含有预定的组织器官或病变　⑶术后活检：检查全面、细致，诊断更可靠细胞学检查　 通过对患者病变部位脱落、刮取和穿刺抽取的细胞进行病理形态学观察，作出定性诊断。目前主要应用于肿瘤诊断。临床医生如何应用诊断病理学：⑴正确选用诊断病理学检查种类；⑵按照诊断病理学的规范要求送检；⑶临床与病理医生应密切合作。临床病理讨论会（clinical pathological conference,CPC）:是临床和病理共同对临床死亡病例的尸检结果与生前诊断及治疗进行对比分析的专题学术会议。外科病理讨论会（surgical pathological conference, SPC):是手术科室的临床医生与病理医生对疑难活检病理进行的小型CPC。病理学常用研究方法组织与细胞化学技术：研究组织与细胞显微结构和超微结构的化学组成及其定位的科学。研究对象是生物大分子：核酸、蛋白质、酶、多糖和脂类等。原理：细胞中化学成分及其相应的底物呈一系列的化学反应，形成在显微镜下可见到的反应产物。常用的染色：孚尔根反应法（feulgen reaction）：显示DNA呈紫红色。甲绿－派郎宁法：显示核酸（甲绿染DNA呈绿色，派郎宁染RNA呈红色）。苏丹Ⅲ冰冻切片染色：显示中性脂肪呈橘红色。普鲁士蓝反应：显示组织中的含铁血黄素。嗜银染色：显示弹力纤维、基底膜、尼氏小体和神经纤维。过碘酸雪夫反应（PAS）：显示糖原和多糖物质为紫红色。免疫组织化学：免疫学原理：应用抗原与抗体接触后可形成“抗原－抗体复合物”的化学反应，以检测组织或细胞内抗原（或抗体）的技术。染色过程中需注意的事项阳性细胞首先符合下列标准：　　1.?切片染色对比度好，背景清晰　　2.?阳性细胞定位要准确　　3.出血、坏死、受挤压的组织及切片边缘不应作为判断的依据 正确设置对照　1.阴性对照：空白对照－PBS置换第一抗体，替代对照－用同种动物的正常血清代替第一抗体2.阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织3.自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照 　参考判断标准 　1.首先将染色强度打分：0分为无色　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1分为淡黄色　　　　　　　　　　　　2分为棕黄色　　　　　　　　　　　　3分为棕褐色　2.再将阳性细胞所占的百分比打分：　　O分为阴性　　1分为阳性细胞≤10％　　2分为11％－50％　 3分为51％-75％　　4分为75％共聚焦激光扫描显微镜技术：细胞组织光学切片：细胞CT或显微CT；三维图像重建；对活细胞的动态观察；细胞内PH及细胞离子的定量测定；细胞间通讯的研究；细胞膜流动性测定。生物芯片：生物芯片是借鉴计算机对生物信号进行平行分析，利用微点阵技术将成千上万个生物信息密码集中到一小片固相基质上，快速完成对生物信号分析的一项技术。常用芯片：基因芯片；蛋白芯片；组织芯片。显微切割技术：是在显微镜下用手工或仪器采样的方法从细胞切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维结构中分离出来，获得纯的细胞群，以备进一步作分子水平的研究。原位杂交(in situ hybridization,ISH)是应用已知碱　基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体，然后再用与标记物相应的检测系统，在被检测的核酸原位形成有色的杂交信号，在显微镜下进行细胞内定位。原位分子杂交是将分子杂交与组织化学(细胞化学)或免疫组织化学相结合的一项技术。 流式细胞分析技术是一种单细胞定量分析和分选的新技术。检测范围包括：细胞表面或细胞内的各种抗原、蛋白、酶、基因表达产物检测；细胞内的核酸定量、DNA倍体、细胞周期分析；癌基因检测、血细胞表型分析、细胞因子和粘附分子的检测、细胞凋亡检测等 多聚酶链式反应技术－PCR。原理：是一个在模板DNA、引物（模板片段两端的已知序列）和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。整个扩增分三步：1.变性：加热使模板DNA双链间的氢键　断裂而形成两条单链；2.退火：降温后模板DNA与引物按碱基配