免疫实验-ICC用细胞抗原制备.docVIP

ICC用细胞抗原的制备一、材料和试剂1、0.01M PBS(pH7.4)： NaCl 8.0g； KCl 0.2g； Na2HPO4 1.44g； KH2PO4 0.24g； ddH2O至1000ml ； 高压灭菌,分装。2、0.25%胰酶：称取EDTA 0.02g NaCl 0.8g KCl 0.04g 加三蒸水100ml溶解后加0.25g 胰酶,轻轻搅动,使胰酶溶解,不要产生泡沫,加酚红少许,调PH值到8.2-8.6,过滤除菌,分装10ml/管,-20℃保存,临用前预温到37℃。3、诱导液(TPA)：12-邻-十四酰-佛波醇-13-乙酸酯(12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate,TPA)溶于丙酮，配成20mg/ml。二、 HYPERLINK /tag/%E5%AE%9E%E9%AA%8C/ \o 实验步骤?(一) 、用96孔 HYPERLINK /tag/%E7%BB%86%E8%83%9E/ \o 细胞培养板制备贴壁细胞抗原(正常贴壁细胞)1、HFF,NIH3T3细胞用含10%血清DMEM完全培养液在75cm2培养瓶中单层培养,使密度达到90%2、倾去培养液,用无菌PBS液5-10ml洗细胞一次,用无菌吸管吸干PBS液。3、加0.25%胰酶(从-20℃取出,在37℃预温)75平方厘米培养瓶加1ml,37℃温箱或有经验者可在酒精灯周围,控