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FISH技术的临床应用 中南大学湘雅医院血研室 荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization，FISH） 基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。 生命科学中的“钓鱼” 技术  操作流程简图 制片 预处理 FISH 结果分析 破坏细胞膜利于探针 杂交。 蛋白酶消化、HCl处理 变性 杂交 洗涤 复染 制备的质量 新鲜程度 操作流程简图 标本为新鲜细胞制片： 阈值建立 采集20例正常人细胞。 阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞数目的百分比。 阈值= 平均数（M）+ 3X标准差（SD） 结果判断 每例样本随机计数细胞（至少100个） 如果检测值阈值，判定为阳性结果； 如果检测值阈值，判定为阴性结果； 如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。 结 果 判 断 FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用 FISH技术在产前诊断中的应用 FISH在泌尿系肿瘤中的应用 FISH技术在宫颈癌检测中的应用 其它 FISH技术的临床应用 FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用 赵荣 骨髓象(CML) 赵荣 血象 （CML） 覃长江血象(MD/MPD) 覃长江骨髓象 (MD/MPD) BCR/ABL阴性 (图片来自覃长江) MD/MPD BCR/ABL阳性 (图片来自赵荣) CML 陆晓逸骨髓象（CLL） D13S25/P53基因阴性 （来自陆晓逸） CSP12基因阴性 （来自陆晓逸） PML/RARa阳性 (图片来自卜丽敏) PML/RARa阴性 (图片来自彭志新) 卜丽敏骨髓象 FISH技术在产前诊断中的应用 染色体异常的发生机率 出生婴儿 0.6% 先天性智力障碍（MR）患者 23% 先天性心脏病 13% SAB 夫妇 5% 死胎和 围产期死亡胎儿 6.0% 自然流产 (前三个月) 60% 唐氏综合症 21号染色体三体, 95-97% 多余的染色体来自母亲, 唐氏综合症与母亲的年龄有关系, 确切的病因不是很了解. 活产新生儿发病率为1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。 智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。 Turner 综合症 1个x染色体的全部或者部分丢失 ，只发生在女性。 是最常见的染色体异常导致的疾病 ( 活产女性新生儿发病率大约为 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、 蹼颈、 肾脏和甲状腺有问题, 骨骼畸形等 生长激素治疗, 雌激素替代治疗等 21+ 13+ GLP13/GLP21阴性 FISH在泌尿系肿瘤中的应用 常用诊断及监测膀胱癌 膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受 细胞形态学检测：敏感性低 尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。 概 述 FISH检测： 9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。 3号、7号及17号染色体的非整倍性。 膀胱癌的灵敏度大约 80%, 特异性大约 96% 非创伤性及非痛苦性 概 述 疾病 名称 检测探针 标记颜色 探针定位 探针名称 患者中常见 异常类型 膀胱癌 GLP P16/CSP17 红/绿 P16：9p21 CSP17:17p11.1-q11.1 P16：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A CSP17:17号染色体着丝粒 P16缺失； 17号染色体非整倍性 临床意义 随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与膀胱癌的早期发生密切相关。P16为抑癌基因，通过CDK4对细胞增殖分裂起负调控作用，CDK4与cyclin D形成复合物促进细胞从G1-S转换，促进细胞有丝分裂，P16基因异常在膀胱癌发生早期出现. 膀胱癌FISH 探针组(一) 疾病 名称 检测探针 标记颜色 探针定位 探针名称 患者中常