第六章口腔细胞培养及其应用.ppt

二、唾液腺细胞 细胞形态特点 腺泡上皮细胞 导管上皮细胞 肌上皮细胞 免疫组织化学染色 腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、 前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分阳性反应 导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应 肌上皮细胞： 肌动蛋白、S－100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应 功能特点 分泌功能 腺泡细胞：淀粉酶、PRP、唾液过氧化物酶、特异蛋白等 腺泡上皮细胞：顶端分泌、基底及侧膜分泌 导管细胞：胶原 肌上皮细胞：胶原 唾液腺细胞的增殖分化 基底潜能干细胞理论 单细胞全能干细胞理论 双细胞亚全能干细胞理论 增殖分化功能影响因素 细胞因子 激素 细胞外基质 钙离子 三、口腔粘膜细胞 培养方法 组织块法 酶消化法 细胞形态特点 细胞的冻存与复苏 所谓冷冻保存，就是将体外培养物或生物活性材料悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。而复苏就是以一定的复温速率将冻存的体外培养物或生物活性材料恢复到常温的过程。不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以进行冻存，并在适当条件下复苏。 低温保护剂的应用 在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻存效果。 常用的低温保护剂是DMSO，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。 冻存和复苏的原则：慢冻快融 当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。 如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反．结晶就大，大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。 常规细胞培养法 原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。 传代培养 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。 细胞培养的污染、检测与控制 微生物污染 空气、器材、操作、试剂、组织标本 微生物污染的检测 细菌和真菌的污染和检测 肉眼直接观察法 培养检查法 显微镜观察法 支原体的污染和检测 造成支原体高污染率的原因： 　　1.支原体大小0.1－0.8 um，无细胞壁，可透过一般过滤膜（0.22-0.45 um）； 　　2.支原体污染时，没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化 ；　　3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式； 　　4.细胞流通间缺乏物品管理，造成实验室间的相互污染； 　　5.研究或操作人员忽略污染问题； 6.已受污染的细胞；  7.已受污染的培养基、血清。 支原体之检测： 相差显微镜观察法、电镜法 Hayflick培养基直接培养法 DNA荧光染色法  PCR方法 微生物污染的控制 抗生素除菌法 加温处理 化学污染 细胞交叉污染 第二节 口腔医学中相关细胞培养及其特点 一、 牙齿相关细胞 牙髓细胞 培养中的细胞成分： 成纤维细胞 未分化的间充质细胞 培养方法 取材 浸泡 修剪 铺瓶 培养 细胞形态特点 免疫组织化学染色 波形丝蛋白表达阳性 角蛋白、神经丝蛋白、结蛋白、胶质细胞 原纤维酸性蛋白表达阴性 生长增殖特点 成功率 快速增殖期 死亡 功能特点 碱性磷酸酶活性 矿化现象 对钙调节因子的作用 对细胞因子的反应 对氢氧化钙、羟基磷灰石盖髓剂的反应 牙周膜细胞 培养方法 取材 浸泡 修剪 铺瓶 培养 培养中的细胞成分： 成纤维细胞 未分化的间充质细胞 细胞形态特点 免疫组织化学染色 波形丝蛋白表达阳性 角蛋白、神经丝蛋白、结蛋白、胶质细胞 原纤维酸性蛋白表达阴性 生长增殖特点 成功率 快速增殖期 死亡 功能特点 分泌功能 矿化功能 收缩功能 附着能力 再生能力 增殖分化影响因素 生长因子 胰岛素 纤维粘连蛋白 抗坏血酸 羟基磷灰石 特点：　 　是细胞增生最活跃、活力最旺盛的阶段 　培养物中细胞数量呈指数增长,细胞群体均一 　是理想的实验用细胞 　　在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3～5天后，随细胞数量不断增多、生长空间渐趋减少、最后细胞相互接触汇合