蛋白质磷酸化及信号传导.pdfVIP

FACSInformation Vol. 45, May 2003 蛋白質磷酸化與信號傳導 對所有真核生物而言，蛋白質的磷酸化是細胞內信號傳遞的關鍵步驟，舉凡在細胞代謝、生 長、增殖、癌變調控方面，蛋白質的磷酸化都扮演著重要角色。目前在真核細胞內已發現有 400 多種蛋白激酶和 1000 多種磷酸蛋白。通過蛋白質磷酸化，機體得以改變細胞內蛋白質活性，或 藉以改變酵素活性、或藉以傳遞信號、或調節細胞內各個生理過程。隨著愈來愈多的信號傳導路 徑被證實與蛋白質磷酸化相關，此一主題己是當今細胞生物學研究的熱點。 蛋白質的可逆磷酸化 蛋白質的磷酸化和去磷酸化是一個可以相互轉化的過程，分別由機體藉由調控細胞內各類蛋 白激酶（protein kinases ）和蛋白磷酸酶（phosphatases ）的活性來啟動或抑制。通過磷酸化和 去磷酸化兩種構象的互變，導致蛋白質活性改變而表達其特殊的生理功能。現已證實，細胞的許 多功能蛋白，如激酶、酶蛋白、受體、視蛋白、運輸蛋白、收縮蛋白、調節蛋白、核蛋白、離子 通道、離子幫浦等，均能發生蛋白質的磷酸化與去磷酸化。蛋白質磷酸化的方式有兩種：一種是 蛋白質自身磷酸化，如胰島素受體、C 激酶、G 激酶、Ca2+·CaM 激酶、EGF 受體、PDGF 受體、 IGF-1 受體、FGF 受體、CSF-1 受體、Na+ + 2+ -K -ATP 酶的α亞基、Ca -ATP 酶的磷酸化等。另 一種是由特殊的蛋白激酶催化的蛋白質磷酸化。蛋白質磷酸化的部位可發生在蛋白質的絲氨酸、 蘇氨酸、酪氨酸、賴氨酸、組氨酸及天門冬氨酸的殘基上，使磷酸化蛋白質發揮著多種多樣的生 物學功能。 BD Biosciences 1 FACSInformaiton Vol. 45, May 2003 細胞內還存在專一性蛋白磷酸酶。這種酶特異地催化酪氨酸和絲氨酸磷蛋白去磷酸化，通過 去磷酸化改變多種功能蛋白（激酶、酶、受體、運輸蛋白、收縮蛋白、離子幫浦、離子通道、視 蛋白、調節蛋白、核蛋白等）的活性，從而調節細胞的代謝、生長、分化、增殖及轉化，在細胞 內生物資訊的傳遞中起極其重要的作用。 新技術：單一細胞之信號傳導 流式分析的主要特色，在於可以同時分析單一細胞的多種特徵，當同時使用多種分子探針， 與表面標記，可同時識別出特定的細胞亞群，如Ｔ淋巴細胞(CD3+) 、B 淋巴細胞(CD19+) 、NK 細胞，並告知該群細胞族群的胞漿內磷蛋白，是否因外在淚活而被磷酸化？是否能因加入信號傳 遞抑制物而去磷酸化？ 傳統方法如西方墨漬法，由於屬於大多數分析(Bulk Assay) ，一般都預設群體中大多數細胞 的作用趨勢相同，作用強度一致，無法顯示異質化群體間的個別差異，如% Responder ，實驗 報告也只能顯示整體細胞的中間值，無法提供單一細胞的測量值。 研習會 本研習會以周邊血淋巴細胞的啟動為例，來介紹「蛋白質磷酸化」流式分析方法。淋巴細胞 的啟動包括一系列連續發生的事件：識別信號、啟動信號的跨膜傳遞、胞內信號傳遞、DNA 結 合蛋白的活化和轉位、基因的轉錄啟動、新分子的表達、細胞因子的分泌、進入細胞周期等等。 應用 phorbol myristate ester （PMA ），或合併應用鈣離子導入劑A23187 來刺激淋巴細胞， 可直接啟動胞漿中信號傳遞途徑中的重要成份 Protein Kinase C （PKC ），迅速而有效地激活T 細胞。PKC 可接著活化 Raf - MEK – ERK 信號途徑（如例圖），提供本示範實驗的陽性對照。 2 FACSInformation Vol. 45, May 2003 抗癌藥物開發之應用 不少癌細胞都有表現異常高的蛋白質磷酸化現象，這種變化很可能是引起細胞周期調控失常 的主因，特別是在所謂 Mitogen Activated Protein Kinase (MAP Kinase)信號途徑發生異常信號 傳遞的頻率很高。發生的原因可能因為生長因子受體的變異，或 Ras 癌基因的活化。