续食品检验技术(第四篇).pptVIP

第四章 微生物检验基础技术 阳江职业技术学院 授课教师：钟旭美 第三节 酵母菌的形态观察技术及其大小测定 酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明 显分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球 状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌 的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生孢子繁殖；酵母菌的 有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系 列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞不分离，就 会形成藕节状的假菌丝。 第三节 酵母菌的形态观察技术及其大小测定 操作方法 （1）涂片法 ① 制片：取一洁净的载玻片，在中央滴一小滴生理盐水（或 无菌水），用接种环在火焰区以无菌操作方式从斜面培养基上 挑取少量菌种，与载玻片上的生理盐水相混合，用接种环轻轻 划动，涂布成一均匀的薄膜，涂布面积不宜过大。取盖玻片一 块，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放 下，这样可避免产生气泡。 ② 镜检 一、酵母菌的形态观察 （2）水-碘浸片观察法 在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘液，然后再在其上加三滴水，取啤酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。 （3）假丝酵母观察法 用划线法将假丝酵母接种在麦芽汁平板上，在划线部分加无菌盖玻片，于 28～30℃ 培养3天，取下盖玻片，放到洁净载玻片上，在显微镜下观察呈树枝状分枝的假菌丝细胞的形状，或打开皿盖，在显微镜下直接观察。 二、酵母细胞大小的测定 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，只有在显微镜下用刻有一定刻度的测微尺才能测量。测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺。先用绝对长度的镜台测微尺在一定放大倍数下来校正相对长度的目镜测微尺，计算目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测的标本，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计算该微生物的大小。 二、酵母细胞大小的测定 测微尺的构造和使用方法 目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央刻有精 确的刻度，通常是将 5mm 等分为 50 小格（或把 10mm 长度等 分为 100 小格），实际每格等于 100μm 。由于不同目镜、物 镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也 不一样，因此测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微 尺来标定，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代 表的相对长度。 镜台测微尺 镜台测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一 小圆圈。圆圈内刻有精确的刻度，将长 lmm 的直线等分为 100 小格，每小格等于 10μm （即 0 . 01 mm ) ，是专门用来标定 目镜测微尺的。 测微尺的构造和使用方法 二、酵母细胞大小的测定 目镜测微尺的校正 目镜测微尺的校正 （4）记录二对重合线间的目镜测微尺所占的格数和镜台测微尺 所占的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10μm ，所以由下 列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 二、酵母细胞大小的测定 （l）在高倍镜下，校正目镜测微尺，并记录和计算目镜测微尺 每格的长度。 （2）将酵母菌斜面制成一定浓度的菌悬液（如 10 等），取 一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。 （3）取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 （4）先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺 来测量酵母菌菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格（不足一 格的部分估计到小数点后一位数），然后换算出菌体的实际长 度。 二、酵母细胞大小的测定 一般测量菌体的大小要在同一标本上测定 5 ～ 10 个菌体，求其平均值，才能代表该菌的大小。而 且一般是用对数生长期的菌体进行测定。 第四节 酵母菌死活细胞鉴定及计数技术 美蓝染料的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。当它 被用来进行活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢，能使 美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活 细胞无色。而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它 们无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡 蓝色。因此，用美蓝染色液制成水浸制片，既可观察到 酵母菌的形态，又可区别酵母菌的死、活细胞。但美蓝 的浓度、作用时间等对酵母细胞均有影响，应加以注意。 鉴别方法如下： （l）用接种环以无菌操作方法取几滴酵母菌菌悬液于一洁净的 载玻片中央，加一滴 0 . 1 ％吕氏美蓝染色液，使菌体与染液均 匀混合。 （2）用镊子取一洁净的盖玻片，小心地盖在液滴上。 （3）将制好的水浸片放置 3～5min 后镜检。在视野内着色者 为死酵母菌；淡蓝色者为老酵母菌；无色者为活酵母菌。注意 美蓝对酵母菌体有毒害作用，随着染色时间的增