转基因育种与方法幻灯片课件.ppt

作物转基因育种 就是根据育种目标，从供体生物中分离目的基因，经 DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，并经过田间试验与大田选择育成转基因新品种或种质资源。 转基因作物（GMC，genetically modified crops）;与常规育种技术相比，转基因育种在技术上较为复杂，要求也很高，但是具有常规育种所不具备的优势： 1.拓宽可利用的基因资源； 2.培育高产、优质、高抗优良品种提供了崭新的育种途径； 3.可以对植物的目标性状进行定向变异和定向选择； 4. 可以大大提高选择效率，加快育种进程。 此外，还可将植物作为生物反应器生产药物等生物制品。;Traditional crossbreeding; ? 一、转基因技术的发展现状 ;;美国：3900万公顷 加拿大：350万公顷 阿根廷：1350万公顷 中国：210万公顷;转基因作物种类 主要为大豆、玉米、棉花和油菜等，以转基因大豆面积最大。 根据美国农业部（USDA）2011年6月30日发布的最新数据，按种植面积计 算，美国种植的88%的玉米、90%的棉花、94%的大豆，都是转基因品种。 ;美国三大转基因作物历年种植面积;First biotech plant product – Flav’r Sav’r tomato;我国转基因作物研究与利用概况 我国是世界上主要商品化种植转基因作物的国家。自行培育的双价转基因烟草的抗病虫性达到60％，产量比对照增加15％，产值增加20％，1992年每亩增收200元，遗憾的是由于市场的原因现已不推广。;经全国基因工程安全委员会批准商品化生产的作物已有： 我国自行研制开发的抗虫转基因棉花（转Bt及Bt+CpTI双价抗虫棉）； 2004年种植转基因棉花370万公顷，占棉花种植面积的50% 美国Monsanto公司开发的Bt抗虫棉； 延迟成熟期的转基因番茄； 抗黄瓜花叶病毒(CMV)转基因番茄； 抗CMV转基因甜椒； 转查尔酮合酶（CHS）反义RNA基因矮牵牛； 转Bt毒蛋白基因的水稻 转ACC反义合成酶的水稻;由中国农科院生物工程中心开发的Bt棉对棉铃虫有显著的抗性。与对照相比减少农药用量80％，并减少用工150个/hm2，以上两者可使每公顷节省1500元，Bt转基因棉种深受棉农的欢迎。;转基因技术简介;转基因的方法和原理;基本步骤;分离基因;目的基因制备和载体系统;(一)目的基因的获得 根据获得基因的途径主要可以分为两大类： 根据基因表达的产物—蛋白进行基因克隆； 从基因组DNA或mRNA序列克隆基因。;2.从基因组DNA或mRNA序列克隆基因; (2)表达序列标签EST是指能够特异性标记某个基因的部分序列，通常包含了该基因足够的结构信息区，可以与其它基因相区分。主要是通过cDNA的途径获得。 获得EST的途径: 大规模cDNA文库测序 各种mRNA水平的分析手段;(3)根据连锁图谱克隆目的基因 图位克隆技术(Map-based cloning);Marker;(4)转座子标签法 转座子是染色体上一段可复制、移动的 DNA片段。当转座子插入到某个功能基因内部时，就会引起该基因的失活，并诱导产生突变型；当转座子再次转座或切离这一位点时，失活基因的功能又可得到恢复。 目前应用最为广泛的转座子系统是Ac/Ds玉米转座子系统。;(5)差异显示法 在生物个体发育不同阶段，或不同的组织与细胞中或不同环境下，基因表达差异。即不同基因有序的时空表达方式，叫做基因的差异表达。差异显示PCR(differential display-PCR,DD-PCR)是指通过对来源特定组织类型的总mRNA进行PCR扩增、电泳，并找出待测组织和对照之间的特异扩增条带。;(6) cDNA微阵列, cDNA 芯片 cDNA序列（纯样）机器点样在支持物,与荧光标记的不同mRNA样品分别进行杂交,通过激光共聚焦扫描分析不同cDNA序列的杂交信号强度,判断该cDNA在不同mRNA样品中的表达丰度.;(6) 电子克隆 in silico cloning 借助于电子计算机，利用公布的核酸序列资料，进行序列的拼接和组装最终获得完整基因序列的技术，类似于cDNA文库的筛选但更加方便和快速。;PCR反应;PCR反应过程;利用cDNA法;cDNA链的合成;（二）目的基因重组质粒的构建 ;质粒载体;质粒载体pBR322;pUC19质粒;λ噬菌体;λ噬菌体载体;柯氏质粒 Cosmid;分离基因;几种有效的转基因方法;转基因技术动物 Transge