探究线粒体活性氧与糖尿病性白内障的关系及茶多酚干预作用的实验研究.pdfVIP

提 任石 弓( 目的 : 通过体 内外 实验探讨 高糖及 茶 多酚干 预对 大 鼠晶状 体上 皮细胞 的影 响 ，阐 明茶 多酚对糖尿病 性 白内障 的预 计疗 效及作用机 制 。 方法 :体外培养大 鼠晶状体上皮细胞 ，培养基 中葡萄糖浓度 分别设定为 sm m ol/l、 3Om m ol月两种浓度 ，在 3Om m ol/l葡萄糖浓度培养基 中分别加入茶 多酚配成 ’0 .1件m ol/I 和 0.3林m ol/l茶 多酚浓度 的培养基进行细胞培养 。用 M M T 检测 晶状体上皮细胞 的活 性 ，流式细胞仪检测 L E C 细胞死亡率和线粒体膜 电位 ，线粒体活性氧 的变化 ， 以及 使用 免疫细胞化学和免疫荧光法检测 内质 网表达量 的变化 。利用统计学分析 高糖及 茶 多酚干预对大 鼠晶状体上皮细胞 的影 响 。体 内试验通过 ST Z 尾静脉注射诱 导建立糖 尿病大 鼠模 型 ，分为正常组 、ST Z 诱导糖尿病组 (ST Z 一D M ) 和茶 多酚干预糖尿病 组 (TP 一D M) 三 组 ，通过 H E 染色 、 电镜观 察大 鼠晶状体 的超微 结构 ，生化法测 定各组大 鼠晶状体 中 G SH 、G R 及 C AT 生化指标 的活性 ， R T-P C R 法检测各组大 鼠晶状体 中 U C P S、M nSO D m R N A 的表达量变化 ，探讨茶 多酚对 ST Z 诱 导糖尿病大 鼠晶状体上 皮细 胞 干 预 的影 响 。 结果 :在 高葡 萄糖浓度 条件 下培养 的上皮细胞逐渐 丧 失原有特 征 ，形态表 现 多样 ， 渐 则细胞肿胀 ，出现 空泡和颗粒 ，细胞数量 明显减少 ，传代后容 易老化 ，死亡率 C D R(% ) 明显升 高 ，线粒体膜 电位 M M P(FI)降低 ，线粒体活性氧增 多 ， 内质 网的阳性率 明显 降低 ; 而 茶 多酚干 预组细胞 则较好 的保 持 了上皮细胞 的形态 ，细胞 之 间紧密相靠 ，排 列规 则 ，较 少 出现细胞肿胀 、空泡和颗粒 等 ，传代 未见老化 ，细胞死亡 率 降低 ，线粒 体膜 电位 升 高 ，线粒体活性氧 的产 生 明显减 少 ，并且 内质 网的阳性 率 明显升 高 。低浓 度 与高浓度 的茶 多酚干预效果差别不 明显 。体外 实验表 明在建模 8 周 时 ，ST Z 一D M 组 76 .2% 的糖尿病大 鼠晶状体表现 为m 级混浊 ，而 T P 一D M 组糖尿病 大 鼠晶状 体 混浊 发 展 不 明显 ，30% 的糖 尿病 大 鼠晶状 体表 现 为 11级 混浊 。第 12 周 时 ST Z 一D M 组糖 尿 病 大 鼠晶状体完全混浊 ，而 T P一D M 组 61.1% 糖尿病大 鼠晶状体表现m 级混浊 。扫描 电 镜观 察大 鼠的 晶状 体 的超微 结构 ，发现 ST Z 一D M 组大 鼠的晶状体 纤维严重 受损 ，而 T P 一D M 组 受损 明显 减 轻 ; 通 过 H E 染色观 察 大 鼠的 晶状 体 细 胞 形态 ，发现 ST Z 一D M 组 的大 鼠晶状 体 纤维细胞 内有大量未被 降解 的细胞器 ，无细胞器 区域缩 小 。而 T P 一D M 组 晶状体 纤维细胞 未被 降解 的细胞器 明显减少 ，无细胞器 区域 显著扩 大 。通过对 大 鼠 公 晶状 体 中 C AT 的活性 和 G SH 的含 量进 行测量 ，发现 S丁Z 一D M 大 鼠品状体 中 C AT 的 活性和 G SH 的含量 均 明显 下 降 ，而 T P 一D M 组 晶状体 中保持 了 C AT 的活州三和 G SH 的 含量 ; 应用 RT-PC R 的方法对 大 鼠晶状体 中 U C PS、M nSO D 表达 的变化进行检测 ，发 现 ST Z 一D M 大 鼠晶状 体 中 U C PZ 及 M nSO D m R N A 表达 量逐渐 减少 ，而 丁P 一D M 组大 鼠晶状体 中的 U C P Z 及 M nSO D m R N A 表达增加且维持在较 高水平 。 结论 : 大 鼠晶状体上皮细胞在 高糖条件下培养 时细胞凋亡 的各项特征 明显加