两系稻培矮64s2fe32微卫星标记图谱的构建及其应用.pdf

两系稻微卫星标记图谱的构建及其应用 7 文献综述 1分子标记概述 遗传标记在遗传学的建立和发展过程中有着举足轻重的作用，同时也 是作物遗传研究和育种的重要工具。目前遗传标记主要分为形态学标记、 细胞学标记、生化标记和DNA分子标记四类。前三种标记都是以基因的 表达为基础，是对基因的间接反映，而基因表达过程本身包含着内外环境 与基因间的相互作用。DNA分子标记则是DNA水平上遗传变异的直接反 映，其表现稳定，信息量大，许多位于编码区，表现选择“中性”，不 受内外环境的影响，与基因表达无关。可见DNA分子标记是最为理想的 遗传标记，这也决定了它们能迅速得到发展和广泛应用(徐云碧和朱立煌， 1994)。 在过去短短的十几年内，已有数十种名称各异的分子标记相继问世， 其分类方法也各不相同。依其遗传特性，可分为显性和共显性两种；依其 多态性检测所用的分子生物学技术，大致可以分为以Southern杂交技术为 Chain Reaction，聚合酶链式反应) 核心的分子标记和以PCR(Polymerase 技术为核心的分子标记；依其在基因组中出现的频率，又可分为低拷贝序 列标记和重复序列标记(王倩和王斌，2000)。 现阶段构建遗传图谱常用的分子标记主要有以下几种。 1．1 RFLP标记 RFLP(Restriction FragmentLength Polymorphism)是限制性片段长度 多态性的简称。它是指用限制性内切酶酶切不同个体基因组DNA后，含 同源序列的酶切片段在长度上的差异，差异的显示和检测是通过电泳并用 而实现(Kochen等，1989)。造成酶切片段的差异是由于在物种进化或遗 传改良中，DNA碱基的突变、插入、缺失、颠换以及染色体结构发生倒 位或易位等，使得限制性内切酶酶切位点及其酶切片段中碱基组成发生改 变，因而可以检测到各种类型的RFLP。 文献综述8 设想，并于1987年构建了第一张人类的RFLP图谱，从此开创了RFLP作 为第一代分子标记应川的先河。由于RFLP具有结果稳定可靠、重复性好、 一般呈共显性等优点，因而倍受植物遗传学家及育剩，家的青睐，并在遗传 育种、连锁图的构建、基因定位、数量性状基因座分析、杂种优势遗传成 因剖析、资源评估、物种起源进化研究(Mohan等，1997；Li等，1997； 90年代初，随着人类基因组研究计划的深入，一种基于RFLP原理的 Tags， Sequence 新的遗传标记也孕育而生，称之为表达序列标签(Expressed EST)。EST主要是在cDNA文库中随机挑选克隆，并进行单边测序 (single．pass RFLP标记相比，它的优越性在于直接与一个表达基因相关，且易于转变 Tagged 成序标位点(Sequence 因此可以为表达基因的鉴别等研究提供大量信息(周弈华等，1999)。目 前，这种技术己被引入植物研究中，在水稻中利用EST作图的研究也越来 越多。1998年日本水稻基因组计划发表的一张高密度水稻连锁图上就包含 了1455个EST标记(Harushima等，2000)。 1．2 RAPD标记 作为分子标记，并将此法命名为RAPD(Random Polymorphic Amplified DNA，随机扩增的多态性DNA)，(Williams等，1990)。 RAPD技术建立于PCR技术的基础上，它是利用一系列不同的随机排 列碱基顺序的寡核苷酸单链(通常为10个碱基)作为引物，对所研究的 基因组DNA进行PCR扩