免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中应用.pptxVIP

免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用 小组成员：田理刚、张帅、田勇、朱林韬、赵建秋、董唯 目 录 1 免疫磁珠技术的介绍 2 免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用 3 小结 1、免疫磁珠技术的介绍 1.1免疫磁珠技术简介 免疫磁珠( Immunomagnetic bead, IMB,简称磁珠)技术,是近年发展起来的将固化试剂特有优点与免疫学反应高度特异性结合于一体的一项新技术。 以免疫学为基础,渗透到病理、生理、药理、微生物、生化及分子遗传学等各个领域,其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到越来越广泛应用。 全自动免疫磁珠技术细胞分选系统AutoMACS Pro 1.2 免疫磁珠的结构 磁性微球 高分子材料 免疫配基 1.3 IMB技术的基本原理 磁珠 特异性抗体 免疫磁珠 加入待测液中 抗原-抗体-磁性免疫复合物 复合物分离出来 撤去磁场 抗原鉴定 磁性外力 以细胞分离为例图解免疫磁珠技术的原理 1.4 IMB技术作用方式 免疫磁珠分离技术 直接法 间接法 第一抗体 第二抗体 直接法是先用抗体包被磁珠,使抗体与磁珠给合(物理吸附或化学结合),再加入抗原物质,二者结合形成磁珠-第一抗体-抗复原合物,在磁力作用下, 与其它物质分离。 间接法是先用羊抗鼠IgG(第二抗体)包被磁珠,使磁珠作为第二抗体载体,当抗原与第一抗体结合后,加入带有第二抗体磁珠,磁珠上第二抗体便与第一抗体结合,形成磁珠-第二抗体-第一抗体-抗原复合物,在磁力作用下,与其它物质分离。 1.5 IMB技术的优点 特异性强、分离速度快、效率高 可重复性好、操作简单 不需要昂贵的仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等 2、免疫磁珠技术在食品有害微生物检测中的应用 大肠杆菌 布鲁式菌 单增李斯特菌 副溶血性弧菌 沙门式菌 黄曲霉菌 金黄色葡萄球菌 阪崎肠杆菌 2.1 IMB技术对大肠杆菌O157H7的检测(GB/T 4789.36-2008) 2.2 IMB技术对单增李斯特菌检测 (SN/T 0184.3-2008) 2.3 IMB技术对布鲁氏杆菌检验 (DB32/T-2016) 2.4 IMB对副溶血性弧菌检验(DB32/T -2010) 2.5 IMB技术对其余食源性致病微生物的检测应用 刘琳琳等人利用“自制的金属螯合免疫磁珠”来检测食品中金黄色葡萄球菌。该法能够在30min内富集检测金黄色葡萄球菌且检测低限可达100 cfu。同时磁珠可保持活性达3周以上。此检测方法同传统鉴定和分离金黄色葡萄球菌的方法相比具有速度快、灵敏性高、成本低的优点。 杜强等人利用“全自动免疫磁珠分选系统”检测食品中沙门氏菌，与国标法相比，全自动免疫珠分选系统取消了SC和TTB增菌，经BPW增菌后直接使用系统富集目标菌并接种显色平板。结果免疫磁珠法阳性检出率为32％，国标法阳性检出率为31％，二者无显著性差异(P0.05)。但磁珠法取消了二次增菌的步骤，检测时间比国标法节省24 h，且平板上的单个菌落生长率和菌株特异性也更好。 支援等人基于抗原抗体反应的免疫学特异性,以及量子点荧光标记的高灵敏度,免疫磁珠磁性分离,免疫量子点荧光标记联合应用的检测方法,对阪崎肠杆菌试验结果表明，能在2h内对乳制品样品中的食源性致病菌（阪崎肠杆菌）进行检测，且方法特异性好，灵敏度高（达10²cfu/mL），其在食品检测领域的应用成为可能。 苏惠玉等人应用“山羊抗黄曲霉菌血清的免疫磁珠”捕获食品中的黄曲霉菌，不需要进行增菌培养，应用磁捕获-荧光聚合酶链式反应(LMC-FPCR)技术快速检测鉴定食品中的黄曲霉菌。结果：IMC-FPCR方法检测黄曲霉菌的最低检测值为2cfu／mL。结论：建立了黄曲霉菌的磁捕获-荧光聚合酶链式反应法 (IMC-FPCR) ，该方法可用于食品中黄曲霉菌的快速检测及鉴定。 2.6 IMB技术在病毒检测中应用 研究者利用抗病毒表面蛋白的单抗或多抗，开发了能捕获病毒颗粒的免疫磁珠， 并对其应用时各个影响因素(孵育温度，时间等)进行了初步评估，证明了利用免疫磁珠技术可捕获病毒颗粒并用于各种检测的可行性。 如Park 等 制备了针对诺如病毒(norovirus)的GⅠ- 1和 GⅡ- 4 外膜蛋白的多克隆抗体，与磁珠偶联获得了相应的免疫磁珠后，采用 IMBS 技术与荧光逆转录 PCR 联用(IMBS-real-time RT-PCR)，对人为污染已知量的诺如病毒的草莓进行检测，结果表明其检出限可低至 3 ～ 7 个 RT-PCR 单位。 2.7 IMB技术在微生物检测应用时的主要影响因素 1 免疫磁珠的质量 2 目标菌、 杂菌及磁珠的比例 3