临床荧光PCR检测影响因素的研究.pdfVIP

临床荧光PCR检测影响因素 的探讨 中国人民解放军第302医院 王海滨 PCR技术在临床应用的几个代表性时间 1998年卫生部临检中心宣布停止临床应用（污染） 2003年SARS，在实验室进行检测，电泳法！ 2009年H1N1临床诊断和治愈出院的评判指标 2014年麻疹爆发流行在临床上的早期诊断 2015年HBV/HCV/HIV在血战筛查试用 临床荧光PCR诊断试剂值得商讨的几个问题  检测低限值：HBV DNA30IU/ML (10-20IU/ML)。  HCV RNA敏感性报告50IU/ML？，无检测临界值实验方案和要求。  样品进样量：乙肝不少于200μl(不应强调) ！  纯化核酸进样量：乙肝核酸加样量不少于20微升、反应体积不少于40微升！ 磁珠参与PCR扩增不适合！  线性范围、精密度的界定：应提供商用的血清盘!  防污染性能评估指标：未强调！无法排除具有先天污染缺陷的试剂盒。  …… 临床荧光PCR定量检测质量环节 与影响因素 熟悉因素环节！方能提高质量！ 临床荧光PCR检测质量环节 实验室设置要求的目的：防污染！ 一室化PCR实验室的可行性与设置 荧光PCR扩增仪器：手机、汽车等。设备耗材 国产SLAN荧光PCR仪器，YOU YOU TOO 如何选择具有防污染特质的“三少两高”试剂盒？ 核酸丢失少、操作步骤少、污染机会少，扩增效率高、精密度高。 人的因素很重要！学习公司的管理模式。 分类：学习型、工作型、示教型、专家型 实验室质量意识的培育：打造狼的团队、苹果产品的业绩 质量意识究竟差多少？ 实验室设置 试剂配制 核酸提取 PCR扩增 开放产物分析 风向 分区目的 减少或避免污染！风向、温湿度、易清洁构造。 移液器和离心机专用。 一室化 COBAS 系统提示：一室化PCR实验室的可行性 尤其是磁珠核酸提取方法：直接掺入！ 非本室工作人员 请勿入内！ 实时荧光PCR扩增仪器的选择与维护 热模块、光学模块、软件功能 荧光PCR试剂盒的质量评价  核酸制备：创新性如何？先天无污染缺陷  PCR扩增试剂：评价性能指标  PCR扩增试剂的使用与影响因素  易防污染性能评价 核酸制备方法 （纯度？效率？丢失？） DNA/RNA核酸纯化皆可，血清 血清、血浆或细胞，干扰 、血浆或细胞，纯化彻底！ 物质！ 煮沸法 PEG等 加热洗 基于磁珠 微量核酸 核酸制备 脱！加 的仪器或 释放剂法 重污染！ 手工提取