分子生物学研究法（下）课件.pptVIP

基因功能研究技术;分子生物学研究方法（下）;6·1 基因表达研究技术;;SAGE程序:;3 ′端cDNA分两份;;;6·1·2 RNA选择性剪切;类型;检测方法;6·1·3 原位杂交技术;FISH的是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以将探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。;与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点 目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。 ;荧光原位杂交显示的着丝粒卫星DNA ;6.1.4 定点突变技术;体外定点突变的具体方法有三种： （1）寡聚核苷酸介导的定点突变； （2）双引物法定点突变（重叠延伸技术）； （3）大引物诱变法。 以上三种方法虽不同，但原理都一致。;1、寡聚核苷酸介导的DNA突变技术;2、重叠延伸技术;3、大引物诱变法;（1）易错PCR技术为代表的无性进化 ;（2）DNA改组技术为代表的有性进化;单一基因;6·2·2 基因敲除技术;基因打靶的必备条件 ;打靶载体（targeting vector） ;;胚胎干细胞（embryo