全血基因组DNA提取试剂盒磁珠法Cat#Yu-BD01.DOC

全血基因组DNA提取试剂盒（磁珠法） 使用说明书（Cat#Yu-BD02-1） 【产品介绍】? 基因组DNA提取试剂采用国内领先的专利技术合成的纳米磁珠颗粒和多次实验优化的缓冲液体系，能从样品中分离纯化高质量核酸。在一定条件下，磁珠表面修饰的核酸结合基团高效吸附目的核酸，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、无毒、便利，提取的核酸质量稳定、纯度高。纯化后的基因组DNA适用于多种后续实验，如PCR、限制性酶切消化、基因测序等。可以从少量人或动物全血中分离纯化出高质量、高浓度的DNA。 【产品特点】 1. 效率高： DNA提取得率高，操作简便、快速、耗时少，提取周期短（图1-2）。 样品名称 样品用量 DNA产量(μg) 全血（白细胞数：6.0E+09/L） 200μL ＞5 2. 安全、无毒害：整个操作过程无需使用苯酚、氯仿等有毒物质，提取环境更加安全。 3. 高纯度： OD260/230在1.7左右，OD260/280在1.8左右。可直接用于酶切、PCR、分子杂交等各种分子生物学实验（图1）。 4. 可自动化：可配合各类核酸自动提取仪，实现高通量提取。 A 图1 200μl全血DNA提取后测定结果。 【试剂盒组成】 试剂盒组成 数量 保存条件 裂解吸附液A 20mL×1瓶 室温避光保存 蛋白酶K 0.25mL×1管 -20℃以下 Buffer AW1 12mL×1瓶 室温避光保存 Buffer AW2 9mL×1瓶 室温保存 洗脱液 5mL×1瓶 室温保存 磁珠 0.5mL×1支 室温保存 使用说明书 1份 【规格】50T/盒 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇 【贮藏与有效期】 裂解吸附液A和Buffer AW1必须室温（15-25℃）避光保存；蛋白酶K保存在-20℃以下（常温运输不影响活性，但收到后应立即放入-20℃保存）；磁珠室温保存；其他所有试剂室温保存，有效期为1年。 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇。 【注意事项】 1、Buffer AW1使用前，加入18mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前，加入21mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为70%。★ 3、洗脱缓冲液使用前平衡至室温（15℃~25℃），洗脱缓冲液温度太低会影响洗脱效果。本洗脱缓冲液不含EDTA，根据不同实验目的洗脱液可以用无核酸酶水或pH8.5的TE替代，提高洗脱温度或重复洗脱可以提高产量。★ 4、磁珠使用前必须充分混匀，由于磁珠沉降较快，在多样本操作时，每加两个样本的磁珠，磁珠即需混匀一次。★ 【操作步骤】 1、裂解吸附液B的配制：使用前按标本数吸取相应体积的裂解吸附液A，每400μL裂解吸附液A中加入5μL 蛋白酶K，闭盖，充分混匀后瞬时离心，配成裂解吸附液B。 2、在1.5mL EP管中加入200μL全血和405μL裂解吸附液B，闭盖。恒温金属浴中60℃，1500 rpm振荡孵育10min。 3、取出EP管，瞬时离心后，开盖，加入异丙醇400μL和10μL混匀的磁珠悬浮液，室温1500rpm振荡10min。 注：磁珠加入前必须充分混匀（可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡1分钟），每加5个标本磁珠需颠倒混匀3次。 4、取出EP管，瞬时离心，将EP管放于磁力架上，吸附磁珠3分钟。 5、在磁力架上，打开EP管盖子，吸弃液体，保留磁珠。 6、加入600μL Buffer AW1后，闭盖。从磁力架上取下EP管，充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注：可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒，使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 7、将EP管放回磁力架，吸附磁珠2分钟至液体清澈（吸附磁珠2分钟后，颠倒磁力架3次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收）。打开EP管盖子，吸弃液体，保留磁珠（需吸干EP管底和管盖中的残留液体）。 注：由于各个实验室磁力架磁力不尽相同，吸附时间可以延长，直至液体清澈。 8、加入600μL Buffer AW2，闭盖。从磁力架上取下EP管，充分混匀使磁珠完全分散至洗液中。 注：可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒，使EP管壁上的磁珠完全分散至洗液中。 9、将EP管放回磁力架，吸附磁珠2分钟至液体清澈（吸附磁珠1分钟后，颠倒磁力架3次，使EP管盖上残留的磁珠被充分回收）。打开EP管盖子，吸弃液体，保留磁珠（需吸干EP管底和管盖中的残留液体）。 注：由于各个实验室磁力架磁力不尽相同，吸附时间可以延长，直至液体清澈。 10、加入600μL无水乙醇，闭盖。从磁力架上取下EP管，充分混匀使磁珠完全分散至无水宜春中。 注：可以在漩涡振荡仪上3000rpm振荡20秒，使EP管壁上的磁珠完全分散至无水乙醇中。 11、将EP管放回磁力架，吸附磁珠1分钟至液体清澈（吸附磁珠30秒