慢病毒介导的shp-1过表达抑制模型小鼠 动脉粥样硬化-lentivirus mediated shp - 1 overexpression inhibits atherosclerosis in mice.docxVIP
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慢病毒介导的shp-1过表达抑制模型小鼠 动脉粥样硬化-lentivirus mediated shp - 1 overexpression inhibits atherosclerosis in mice
原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日慢病毒介导的SHP-1过表达抑制模型小鼠动脉粥样硬化研究生张兵兵导师万大国教授郑州大学第二附属医院心内科河南郑州450014摘要背景和目的:动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是血管疾病中最常见、最重要、最基础的一种,其特点就是动脉管壁逐渐增厚变硬,进而失去弹性,最后管腔缩小;粥样硬化病变的形成是动脉对内膜损伤作出的炎症-纤维增生性反应的结果,包括局部脂类和复合糖类聚集、纤维组织增生、钙质沉积及炎症反应等形成斑块,最终继发斑块内出血、斑块破裂及局部血栓形成,进而引起一系列恶性事件,严重者甚至失去生命。动脉粥样硬化(AS)是以脂质代谢紊乱、血管内皮细胞受损、炎性细胞浸润、斑块破裂和血栓形成为特征的长期慢性病理过程。因此,动脉粥样硬化(AS)基因治疗的的发展可以从这四个方面寻找治疗的靶点。CD40是一种I型跨膜蛋白,研究表明CD40高表达于人体和动物模型的动脉粥样硬化斑块中,抑制CD40信号传导则可促进动脉粥样硬化斑块消退;SHP-1是CD40信号传递的重要调控蛋白,其过表达可阻碍CD40对下游p38MAPK蛋白的活化以及炎症反应,含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1(SH2-domain-containingprotein-tyrosinephosphatase-1,SHP-1)是一种胞内蛋白酪氨酸磷酸酶,其N-末端包含有2个Src同源结构域,主要表达于造血细胞系如T细胞、B细胞、单核细胞和上皮细胞系中。本研究通过建立动脉粥样硬化模型小鼠,利用慢病毒载体体内转染动脉粥样硬化斑块,来研究含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)慢病毒载体在动脉粥样硬化模型小鼠中的作用,从而为预防和治疗动脉粥样硬化斑块提供靶标。I材料和方法:将45只8周龄雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为3组,即对照组、绿色荧光蛋白(GFP)转染组、SHP-1转染组。3组小鼠右侧颈总动脉植入套环并高脂喂养8周,随后分别转染GFP空载体和SHP-1慢病毒(SHP-1-LV)。分别于转染第1、2、6周检测硬化斑块荧光强度、小鼠体重、血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平变化,并利用qRT-PCR和Westernblot检测右侧颈总动脉中SHP-1、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等基因的表达,最后制作切片染色观察斑块病理变化。结果:荧光显微镜下观察到慢病毒转染第1、2、6周后斑块具有明显荧光,且在第一周时荧光强度最高慢病毒转染对小鼠体重和血清胆固醇(Serumcholesterol)、甘油三脂(Triglyceride)水平无显著影响。SHP-1-LV转染显著上调右侧颈总动脉中SHP-1mRNA和蛋白的表达,同时抑制IL-6、TNF-α、MMP-2、MMP-9等表达水平。SHP-1-LV转染也降低右侧颈总动脉斑块面积比、脂质含量。结论:过表达酪氨酸磷酸酶-1(SHP-1)可有效促进小鼠动脉粥样硬化斑块消退,从而为预防和治疗动脉粥样硬化提供靶点。关键词:含SH2结构域的酪氨酸磷酸酶-1动脉粥样硬化慢病毒ApoE基因敲除小鼠IIOverexpressionofSHP-1mediatedbylentivirusrestrainsatherosclerosisprogressioninmicemodelsPostgraduate:BingbingZhangSupervisor:Prof.DaguoWanDepartmentofCardiologyTheSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan,450014AbstractBackgroundandObjectivesAtherosclerosisisthemostcommon,
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