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基因克隆技术论文 16药生1班 晓全制作 2017.12.23 第（八）组成员任务分工 基因与克隆 1.基因 基因是具有遗传效应的DNA片段。基因支持着生命的基本构造和性能，储存着生命的种族、血型、孕育、生长、凋亡等过程的全部信息。环境和遗传的互相依赖，演绎着生命的繁衍、细胞分裂和蛋白质合成等重要生理过程。生物体的生、长、衰、病、老、死等一切生命现象都与基因有关。它也是决定生命健康的内在因素。 带有遗传讯息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因。(这涉及到了基因工作组的力量，人类的基因工作组与果蝇的基本相似) 基因与克隆 2.克隆 克隆在广义上是指利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。在园艺学上，克隆是指通过营养生殖产生的单一植株的后代，很多植物都是通过克隆这样的无性生殖方式从单一植株获得大量的子代个体。在生物学上，是指选择性地复制出一段DNA序列（分子克隆）、细胞（细胞克隆）或是个体（个体克隆）。 基因克隆的概述 基因克隆是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术，可概括为∶分、切、连、转、选。最终目的在于通过相应技术手段，将目的基因导入寄主细胞，在宿主细胞内目的基因被大量的复制。分是指分离制备合格的待操作的DNA，包括作为运载体的DNA和欲克隆的目的DNA。切是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA，或者切出目的基因;连是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来，形成重组的DNA分子;转是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增;选则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。基因工程技术的两个最基本的特点是分子水平上的操作和细胞水平上的表达，而分子水平上的操作即是体外重组的过程，实际上是利用工具酶对DNA分子进行外科手术。 基因克隆的过程 （1）目的DNA片段的获得：DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子，这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的方法有机械切割和核酸限制性内切酶消化。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因。 基因克隆的过程 （2）载体选择：载体应具有一些基本的性质:1.在宿主细胞中有独立的复制和表达的能力。2.分子量尽可能小利于。3.具有两个以上的遗传标记。4.具有尽可能多的限制酶单一切点。常用的载体有:质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，单链DNA噬菌体载体，噬粒载体及酵母人工染色体等。根据载体的使用目的可分为克隆载体，表达载体，测序载体，穿梭载体等。 基因克隆的过程 （3）体外重组：是指体外将目的片断和载体分子连接的过程。核酸限制性内切酶能够切割DNA分子形成黏性末端，用同一种酶或同尾酶切割适当载体的多克隆位点便可获得相同的黏性末端，黏性末端彼此退火，通过T4 DNA连接酶的作用便可形成重组体，此为黏末端连接。当目的DNA片断为平端，可以直接与带有平端载体相连，此为平末端连接。 导入受体细胞：载体DNA分子上具有能被原核宿主细胞识别的复制起始位点，因此可以在原核细胞如大肠杆菌中复制，重组载体中的目的基因随同载体一起被扩增，最终获得大量同一的重组DNA分子。 基因克隆过程 （4）重组子的筛选：从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选。 结束，谢谢观看！ 联系我 QQ:1533215104 手机