中耳胆脂瘤的相关研究ppt课件.ppt

中耳胆脂瘤上皮过度增殖行为与MDM2的相关性研究; 前 言; 进 展 ; 疑 难 问 题 ;p53;收集2000年6月至2003年12月间本院手术标本32例，经临床和病理检查确诊为后天继发性胆脂瘤。其中男性18例，女性14例，年龄16-56岁，平均年龄32.5岁。同时取正常外耳道皮肤12例做正常对照。 ;免疫组化方法采用SP法，步骤如下： 1、切片常规脱蜡，充分水化； 2、PBS冲洗3次，每次5 min； 3、3%过氧化氢甲醇溶液孵育，室温10 min，以阻断内 源性过氧化物酶的活性； 4、PBS冲洗3次，每次5 min； 5、0.1%胰蛋白酶 37℃消化20 min； 6、PBS冲洗3次，每次5 min； 7、0.01M 枸橼酸盐缓冲液PH6.0加热92℃，抗原修复 8、蒸馏水冲洗3次，每次5 min，PBS浸泡5 min； 9、10%非免疫性山羊血清，室温下10 min； ;10、吸去多余的血清，滴加适当稀释的第一抗体，4℃ 过夜； 11、PBS冲洗3次，每次5 min； 12、滴加生物素标记的 第二抗体，37℃孵育30 min； 13、PBS冲洗3次，每次5 min； 14、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，37℃孵育 30 min； 15、PBS冲洗3次，每次5 min； 16、滴加新鲜配制的DAB，显微镜下观察掌握染色情况； 17、自来水冲洗，苏木精复染核，中性树胶封片。 免疫组化染色过程中，用PBS代替一抗做阴性对照。 ; 结 果 ; 结 果 ; 结 果 ; ① MDM2蛋白的高表达从胆脂瘤上皮的基底层 向外逐渐增强，基底层表达最少，颗粒层和 角质层表达最强。 ② 结合以往有关p53基因表达结果，我们推测 MDM2在胆脂瘤组织中的高表达，可能是由 于细胞中野生型p53基因激活诱导的。 ; ③ 但是在胆脂瘤组织中出现p53和MDM2在胆脂 瘤的棘层、颗粒层共存的现象，表明MDM2没 有通过结合p53蛋白，使p53功能丧失。我们推 测胆脂瘤上皮的过度增殖和凋亡可能存在 p53/MDM2反馈环调节失常，主要是棘层和颗 粒层细胞的调节失常。 ; ④ 基底层细胞中MDM2的低表达，表明MDM2 与p53??合形成的复合物减少，导致p53表达的 增强，推测基底层细胞可能保持正常的 p53/MDM2反馈调控，这可能是维持胆脂瘤基 底层细胞正常生长的基础之一。; 小 结 ;Thanks！