脐血干细胞对1型糖尿病小鼠治疗作用及机制-therapeutic effect and mechanism of umbilical cord blood stem cells on type 1 diabetes mice.docxVIP

1.缩略词表英文缩写英文名称中文名称ADAAmericanDiabetesAssociation美国糖尿病协会BWBodyweight体重BNPBrainNatriureticPeptide脑钠肽CDSChineseDiabetesSociety中华医学会糖尿病学分会cDNAcomplementaryDNA互补DNAELISAenzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附测定FPGFastingPlasmaGlucose空腹血糖FFAFreeFattyAcids游离脂肪酸HbA1cHemoglobinA1c糖化血红蛋白HRPhorseradishperoxidase辣根过氧化物酶MafAA-MafMusculoapOneuroticFibrosarcomaOncogene肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A基因mRNAMessengerRNA信使RNAPDX-1PancreasDuodenalHomeobox-1胰岛十二指肠同源盒1PCRpolymerasechainreaction聚合酶连锁反应PBSPhosphateBufferSolution磷酸盐缓冲液PPGpostprandialglucose餐后血糖UnitedKingdomProspectiveDiabetesUKPDSStudy英国前瞻性糖尿病研究UCBumbilicalcordbloodstemcells脐血干细胞WBWesternblot蛋白免疫印迹法TNNELTdT-mediateddUTPnickendlabeling细胞凋亡TGTotalGlycerin甘油三酯2.中文摘要脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗作用及机制探讨目的建立1型糖尿病小鼠模型，研究脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗作用，并探讨其中的机制。方法健康3月龄健康雄性小鼠45只，所有小鼠适应性喂养1周后，随机分为3组：正常组、模型组、治疗组。治疗组和模型组是经尾静脉一次性注射四氧嘧啶55mg/kg体重（BW），2h后给予5%葡萄糖灌胃预防反应性低血糖的发生，3d后剪尾取血，微量血糖仪检测空腹血糖，血糖≥16.7mmol/L为造模成功。造模成功后第5天治疗组给予尾静脉一次性注射脐血干细胞，浓度为1×10^7/L，按照1ml/100gBW给药[5]。模型组经尾静脉一次性注射同等体积的脐血干细胞缓冲液；正常组尾静脉注射同等体积的生理盐水。观察各组小鼠的进食，饮水，体重变化情况。并分别于第5、10、15天取各组小鼠尾静脉血检测血糖；实验结束后，处死采血，采用放射免疫法检测正常组、模型组及治疗组小鼠血清胰岛素、C肽水平，HE染色法观察各组小鼠肾脏及胰腺形态学特点，用Westenblot和PCR法检测胰腺组织胰十二指肠同源盒1（PDX-1）以及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A基因（MafA）的表达，并对条带进行相对光密度分析，免疫组化法检测PDX-1、胰岛素基因以及凋亡基因TUNEL的表达水平。采用SPSS17.0统计软件进行分析，数据以x±s表示，采用单因素方差分析，进一步采用LSD法进行多重比较，P0.05为差异有显著性。结果（1）各组大鼠一般情况监测各组小鼠第5、10、15天的进食、饮水及体重情况，模型组小鼠进食、饮水量逐渐增加，体重逐渐减轻，与正常组比较差异均有统计学意义（P0.05），治疗组小鼠进食、饮水逐渐下降，体重呈下降趋势，与模型组相比差异有统计学意义（P0.05）。而模型组小鼠血糖均有不同程度的升高，与正常组相比差异有统计学意义（P0.05），治疗组小鼠血糖逐渐下降，第10、15天平均血糖水平与模型组相比差异有统计学意义（P0.05）。（2）各组小鼠血清C肽、胰岛素水平水平正常组、模型组、治疗组胰岛素值（uIU/ml）分别为：13.04±1.40、8.74±1.20、11.81±0.90；C肽值（pg/ml）分别为：0.15±0.02、0.08±0.03、0.13±0.03。模型组小鼠血清胰岛素、C肽水平显著降低（P0.01），分别为正常组的0.67和0.53倍；治疗组大鼠血清胰岛素、C肽分别上升至正常组的0.91和0.87倍，与正常组比较差异均无统计学意义。（3）各组小鼠的肾脏、胰腺形态学表现高倍镜下观察，正常组小鼠肾脏肾小球形态规则、轮廓清晰，肾小管排列规则、形态饱满；而模型组小鼠肾脏肾小球体积萎缩，囊腔消失，边缘欠清，个别甚至呈玻璃样变性，肾小管排列紊乱，少数管腔塌陷、变窄；治疗组肾脏病变较模型组减轻，肾小球囊腔存在，边缘尚清晰，肾小管形态尚完整。正常组小鼠胰腺胰岛及其细胞数量丰富，胰岛边界清楚；而模型组小鼠胰岛数量减少，边界欠清，形态不规则，少数胰岛可见融合；干细胞治疗组胰岛数量有所减少，但结构尚清晰。（4）Westernblot和PCR法显示各组小鼠胰腺组织PD